Screen Quest 荧光法脂肪酸摄取检测试剂盒

Screen Quest 荧光法脂肪酸摄取检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的脂肪酸检测试剂盒，脂肪酸摄取是治疗许多人类疾病（例如肥胖症，2型糖尿病和肝脏脂肪变性）的重要治疗靶标。 Screen Quest 荧光脂肪酸摄取分析试剂盒为测量含有脂肪酸转运蛋白的细胞中的脂肪酸提供了一种简单而灵敏的方法。 该试剂盒使用专有的十二烷酸荧光脂肪酸底物。 该脂肪酸摄取测定试剂盒可在具有底读模式或FITC通道的任何荧光酶标仪上进行。 该测定可以在96孔或384孔微量滴定板中以简单的混合和读取程序进行，并且易于适应高通量筛选应用。，为您提供优质的Screen Quest 荧光法脂肪酸摄取检测试剂盒。 

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中培养细胞4-6小时
2.将细胞转移到无血清培养基中1小时，并根据需要处理细胞
3.加入100μL/孔的脂肪酸染料加载溶液
4.监测荧光增加在Ex / Em = 485/515 nm处立即进行动力学或在孵育60分钟后进行终点读数（底部读取模式）

 

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
TF2-C12脂肪酸原液：
将20μLDMSO（组分C）加入到TF2-C12脂肪酸（组分A）的小瓶中并充分混合。 注意：20μL荧光脂肪酸底物原液足以用于一个平板。 如果将管密封并避光，可以将未使用的荧光脂肪酸底物储备溶液等分并在<-20℃下储存长达两个月。 避免反复冻融循环

 

2.工作溶液配制

脂肪酸染料加载溶液：
将20μLTF2-C12脂肪酸储备溶液加入10mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合。 注意：10毫升脂肪酸染料加载溶液足以用于一个平板; 为每个平板做准备并进行实验。

 

操作步骤

1.根据需要用测试化合物处理细胞。

2.从培养箱中取出化合物处理的细胞板，加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）（包括空白孔）的脂肪酸染料加载溶液。

3.使用底部读取模式，使用荧光酶标仪在Ex / Em = 485 / 515nm（在495nm处截止）测量荧光信号。 注意：对于动力学读数：立即以20秒间隔读取荧光强度30-60分钟。 注意：对于终点读数：读取30-60分钟孵育结束时的荧光强度。

 

数据分析

图1. 3T3-L1脂肪细胞和成纤维细胞对脂肪酸摄取的比较。 将细胞以50,000个细胞/ 100mL /孔接种在96孔黑色壁/透明底部聚-D赖氨酸平板中5小时，然后将血清剥夺1小时。 在没有（对照）或用胰岛素（150nM）处理细胞，并在37℃，5％CO 2培养箱中孵育30分钟。 在孵育时间结束时，将100μl脂肪酸混合物加入孔中，并再孵育60分钟，使用底部读取模式用FlexStation读板仪测量荧光信号。 A  - 成纤维细胞（对照）; B  - 成纤维细胞（胰岛素）; C  - 脂肪细胞（对照）; D-脂肪细胞（胰岛素）。

 

参考文献

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