鬼笔环肽-AF488标记

产品外观形态：液体（注：鬼笔环肽系列产品有固体和液体两种，液体为DMSO溶解后的产品，则不需再溶解。）

鬼笔环肽-AF 488标记探针会选择性地结合F-肌动蛋白,一般在纳摩尔浓度下使用，鬼笔环肽衍生物是非常方便的荧光探针，用于标记、鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片中的F-肌动蛋白，细胞培养物或无细胞实验。肌动蛋白是一种球状的，大约42kDa的蛋白质，几乎存在于所有真核细胞中。 它也是高度保守的蛋白质之一，与藻类和人类不同的物种相差不超过20％。肌动蛋白参与许多重要的细胞过程，包括肌肉收缩、细胞运动、细胞分裂和胞质分裂、囊泡和细胞器运动、细胞信号传导，以及细胞连接和细胞形状的建立和维持。

鬼笔环肽比肌动蛋白单体更紧密地结合肌动蛋白丝，导致肌动蛋白亚基从丝状末端解离的速率常数降低，基本上通过防止丝解聚来稳定肌动蛋白丝。此外，发现鬼笔环肽抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。鬼笔环肽在细胞中以不同浓度起作用不同。当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将较少聚合形式的细胞质肌动蛋白以及微丝蛋白聚集成聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”，但它不会干扰应力纤维，即厚的微丝束。鬼笔环肽的性质是通过用荧光类似物标记鬼笔环肽并用它们染色肌动蛋白丝用于光学显微镜来研究F-肌动蛋白在细胞中的分布的有用工具。鬼笔环肽的荧光衍生物已经证明在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及在体外可视化单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率肌动蛋白研究中的重要工具。 鬼笔环肽-AF 488标记探针是AAT Bioquest为多色成像应用提供的一种荧光鬼笔环肽衍生物。我们提供的鬼笔环肽iFluor488是AF488鬼笔环肽的替代品。

点击查看光谱

样品分析方案

概述

在微孔板孔中制备样品

从样品中取出液体

添加鬼笔环肽-AF 488 标记溶液（100μL/孔）

在室温下染色细胞20至90分钟

清洗细胞在显微镜下观察样品

注意：将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。

 

操作步骤

1.将 1 µL 的鬼笔环肽缀合溶液添加到 1 mL含1% BSA 的 PBS 中。

注意1：鬼笔环肽缀合物未使用的储备溶液应等分并储存在-20℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。鬼笔环肽缀合物工作溶液的浓度的制备需要根据实际而定。

2.染色细胞：

2.1执行甲醛固定，在室温下将含3.0-4.0％甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。

注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS冲洗固定细胞2-3次。

2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

2.4将100μL/孔（96孔板）鬼笔环肽缀合物工作溶液加入固定的细胞中，并在室温下染色细胞20至90分钟。

2.5在加上盖玻片之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽缀合物，然后在显微镜下进行，密封和成像。

 

参考文献

β-tricalcium phosphate composite ceramics with high compressive strength, enhanced osteogenesis and inhibited osteoclastic activities
Authors: Ye Tian, Teliang Lu, Fupo He, Yubin Xu, Haishan Shi, Xuetao Shi, Fei Zuo, Shanghua Wu, Jiandong Ye
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2018)

Deficiency in augmenter of liver regeneration accelerates liver fibrosis by promoting migration of hepatic stellate cell
Authors: Wei-lun Ai, Ling-yue Dong, Jing Wang, Zi-wei Li, Xin Wang, Jian Gao, Yuan Wu, Wei An
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease (2018)

Developmental dynamics of myogenesis in Pacific oyster Crassostrea gigas
Authors: Huijuan Li, Qi Li, Hong Yu, Shaojun Du
Journal: Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology (2018)

Effect of substrate stiffness on hepatocyte migration and cellular Young's modulus
Authors: Tingting Xia, Runze Zhao, Wanqian Liu, Qiping Huang, Peixing Chen, Yasinta Ningsih Waju, Mohanad Kh Al-ani, Yonggang Lv, Li Yang
Journal: Journal of cellular physiology (2018)

MMP-2 responsive fluorescent nanoprobes for enhanced selectivity of tumor cell uptake and imaging
Authors: Lu Sun, Shuping Xie, Xiuru Ji, Jingming Zhang, Dongmei Wang, Seung Jin Lee, Hyukjin Lee, Huining He, Victor Yang
Journal: Biomaterials Science (2018)

Tailoring the mechanical property and cell-biological response of β-tricalcium phosphate composite bioceramics by SrO-P 2 O 5-Na 2 O based additive
Authors: Fupo He, Teliang Lu, Ye Tian, Xue Li, Fei Zuo, Xuetao Shi, Jiandong Ye
Journal: Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials (2018)