鬼笔环肽-荧光素标记（FITC标记）

产品外观形态：液体（注：鬼笔环肽系列产品有固体和液体两种，液体为DMSO溶解后的产品，则不需再溶解。）

这种绿色荧光鬼笔环肽缀合物（相当于FITC标记的鬼笔环肽）会选择性结合F-肌动蛋白。鬼笔环肽衍生物经常以纳摩尔浓度使用，常在甲醛固定和透化的组织切片、细胞培养或无细胞实验中用于标记、鉴定和定量F-肌动蛋白的便捷探针。鬼笔环肽与肌动蛋白丝的结合比与肌动蛋白单体的结合要紧密得多，从而导致肌动蛋白亚基从丝端解离的速率常数降低，从而通过防止丝解聚而基本稳定了肌动蛋白丝。而且，发现鬼笔环肽抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。鬼笔环肽在细胞中不同浓度下的功能不同。当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将聚合度较低的胞质肌动蛋白和纤维蛋白吸收到聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”中，但它不会干扰应力纤维，即厚的微丝束。鬼笔环肽的性质是研究F-肌动蛋白在细胞中分布的有效工具，方法是用荧光类似物标记鬼笔环肽并将其用于染色肌动蛋白丝以进行光学显微镜观察。鬼笔环肽的荧光衍生物已被证明在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及体外观察单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率研究肌动蛋白网络的重要工具。鬼笔环肽-荧光素标记探针是AAT Bioquest为多色成像应用提供的一种荧光鬼笔环肽衍生物。

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样品分析方案

概述

在微孔板孔中制备样品

从板中的样品中取出液体

添加鬼笔环肽-荧光素标记溶液（100μL/孔）

在室温下染色细胞20至90分钟

清洗细胞在显微镜下观察样品

注意：将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。

 

操作步骤

1.将 1 μL 的鬼笔环肽-荧光素缀合物溶液添加到 1 mL 含 1% BSA的PBS 中。

注意1：鬼笔环肽缀合物未使用的储备溶液应等分并储存在-20℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。鬼笔环肽缀合物工作溶液的浓度的制备需要根据实际而定。

2.染色细胞：

2.1执行甲醛固定，在室温下将含3.0-4.0％甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。

注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS冲洗固定细胞2-3次。

2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

2.4将100μL/孔（96孔板）鬼笔环肽缀合物工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞中，并在室温下染色细胞20至90分钟。

2.5在加上盖玻片之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽缀合物，然后在显微镜下进行，密封和成像。

 

试剂应用文献

Mussel-inspired conductive nanofibrous membranes repair myocardial infarction by enhancing cardiac function and revascularization

Authors: Yutong He, Genlan Ye, Chen Song, Chuangkun Li, Weirong Xiong, Lei Yu, Xiaozhong Qiu, Leyu Wang
Journal: Theranostics. 2018; 8(18): 5159–5177.

 

参考文献

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Authors: Junjian Chen, Yuchen Zhu, Menghua Xiong, Guansong Hu, Jiezhao Zhan, Tianjie Li, Lin Wang, Yingjun Wang
Journal: ACS Biomaterials Science & Engineering (2018)

Mussel-inspired conductive nanofibrous membranes repair myocardial infarction by enhancing cardiac function and revascularization
Authors: Yutong He, Genlan Ye, Chen Song, Chuangkun Li, Weirong Xiong, Lei Yu, Xiaozhong Qiu, Leyu Wang
Journal: Theranostics (2018): 5159

Biomaterial Surface Can Modify HUVEC Morphology and Inflammatory Response by Regulating MicroRNA Expression
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Cell-Permeable, MMP-2 Activatable, Nickel Ferrite and His-tagged Fusion Protein Self-Assembled Fluorescent Nanoprobe for Tumor Magnetic Targeting and Imaging
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Enhanced bovine serum albumin absorption on the N-hydroxysuccinimide activated graphene oxide and its corresponding cell affinity
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Grafting of Ring-Opened Cyclopropylamine thin films on Silicon (100) Hydride via UV Photoionization
Authors: Joline Tung, Jing Yuan Ching, Yoke Mooi Ng, Lih Shin Tew, Yit Lung Khung
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Microtopography Attenuates Endothelial Cell Proliferation by Regulating MicroRNAs
Authors: Dan Wang, Mengya Liu, Shuangying Gu, Yue Zhou, Song Li
Journal: Journal of Biomaterials and Nanobiotechnology (2017): 189--201

Paxillin facilitates timely neurite initiation on soft-substrate environments by interacting with the endocytic machinery
Authors: Ting-Ya Chang, Chen Chen, Min Lee, Ya-Chu Chang, Chi-Huan Lu, Shao-Tzu Lu, De-Yao Wang, Aijun Wang, Chin-Lin Guo, Pei-Lin Cheng
Journal: eLife (2017): e31101