Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒

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荧光显微镜
Ex:	DAPI 滤波片组
Em：	DAPI 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板

样品实验方案

简要概述

1.用您的测试化合物以1-2×10⁴个细胞/孔的密度制备细胞
2.添加自噬Super Blue 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分钟
4.用洗涤缓冲液洗涤细胞
5.使用DAPI滤光片组检测在Ex / Em = 330/520 nm（截止= 475 nm）处的荧光

 

溶液配制

 工作溶液配制

将20μL500X自噬Super Blue （组分A）添加到10 mL染色缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Autophagy Super Blue 工作溶液，避光。 注意：20μL500X自噬Super Blue （组分A）足以容纳一个96孔板。

 

实验步骤

1.根据您的特定诱导方案将细胞培养至适合自噬诱导的密度（约1-2×10⁴细胞/孔/ 96孔板）。同时，在每种标记条件下，以与诱导种群相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞种群。

2.除去培养基。

3.在每孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的自噬Super Blue 工作溶液。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。

5.用洗涤缓冲液（组分C）洗涤细胞3-4次，然后向每个孔中添加100 µL洗涤缓冲液（组分C）。注意：建议增加标记浓度或孵育时间，使染料在细胞未充分染色的情况下积累。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 330/520 nm（Cutoff = 475 nm）上检测荧光强度，或使用带有DAPI滤光片组的荧光显微镜。
 

图示

 

 

图1.通过自噬在HeLa细胞中诱导自噬Super Blue 标记的囊泡。 将HeLa细胞在常规DMEM培养基（左：对照）中或在含5％血清的1X HBSS缓冲液中（右：自噬处理）孵育16小时。对照细胞和处理过的细胞均在37°C，5％CO2培养箱中与Autophagy Super Blue 工作溶液一起孵育20分钟，并用洗涤缓冲液洗涤3次。 立即在带有DAPI通道（蓝色）的荧光显微镜下对细胞成像。 细胞核用Nuclear Gree LCS1（绿色）染色。

 

 

参考文献

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