细胞膜荧光探针DiI,高氯酸盐 CAS 41085-99-8

细胞膜荧光探针DiI,高氯酸盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记细胞膜的荧光探针，DiA，DiI，DiO，DiD和DiR染料是用于标记细胞膜和其他疏水结构的亲脂荧光染料家族。当掺入膜中或与亲脂性生物分子如蛋白质结合时，这些对环境敏感的染料的荧光大大增强，尽管它们在水中是弱荧光的。它们具有高消光系数，极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦应用于细胞，这些染料在细胞质膜内横向扩散，导致整个细胞在其浓度下均匀染色。 DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）的独特荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激发，并且具有比DiI更长的激发和发射波长，为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。由于红外光通过细胞和组织的有效传输以及红外范围内的低水平自发荧光，DiR可用于体内成像或示踪。是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的细胞膜荧光探针。

Di系列染料	特点	选择建议
DiO染料（绿色）	活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。	DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色；
DiA染料（绿色）	一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料（橙色）	活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料（橘色）	一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料（红色）	染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。
DiS染料（红色）	一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料（深红色）	常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

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样本分析

1.制备DiO，DiI DiD，DiS或DiR膜染色溶液：
1.1制备DMSO或EtOH储备溶液：储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。
注意：储备溶液的未使用部分应储存在-20℃。 避免反复冻/融循环。
1.2准备工作溶液：将储备溶液（步骤1.1）稀释到合适的缓冲液中，如无血清培养基，HBSS或PBS，制成1至5uM的工作溶液。
注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定工作溶液的浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。

2.将细胞染成悬浮液：
2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×10⁶ / mL（来自步骤1.2）。
2.2在37°C孵育2-20分钟。培养时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。
2.4去除上清液，轻轻地将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中。
2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。

3.染色贴壁细胞：
3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。
3.2从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。
3.3将100μL染料工作溶液（来自步骤1.2）吸移到盖玻片的角落，轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。
3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 培养时间根据细胞类型而变化。开始孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
3.5排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片两到三次。 对于每个洗涤循环，用预热的生长培养基覆盖细胞，孵育5-10分钟，然后排出培养基。

4.显微镜检测：
4.1表1总结了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR滤波器组的选择。
4.2对于同时检测多种染料，可提供如下多波段滤波器组：
a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004
b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007
c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

5.流式细胞仪检测：
用DiO，DiI，DiD，DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。

 

参考文献

Intraurethral co-transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells and muscle-derived cells improves the urethral closure
Authors: Anna Burdzinska, Bartosz Dybowski, Weronika Zarychta-Wisniewska, Agnieszka Kulesza, Marta Butrym, Radoslaw Zagozdzon, Agnieszka Graczyk-Jarzynka, Piotr Radziszewski, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
Journal: Stem cell research & therapy (2018): 239

Loss of Integrity of Doxorubicin Liposomes during Transcellular Transportation Evidenced by Fluorescence Resonance Energy Transfer Effect
Authors: Dong Li, Jie Zhuang, Yinqian Yang, Dandan Wang, Jinlong Yang, Haisheng He, Wufa Fan, Amrita Banerjee, Yi Lu, Wei Wu
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2018)

Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects
Authors: Zhiwang Song, Yun Lin, Chan Feng Xia Zhang, Yonglin Lu, Yong Gao, Chunyan Dong
Journal: International Journal of Nanomedicine (2017): 1941

In vivo imaging system for explants analysis—A new approach for assessment of cell transplantation effects in large animal models
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzinska, Radoslaw Zagozdzon, Bartosz Dybowski, Marta Butrym, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
Journal: PloS one (2017): e0184588

Influence of Particle Geometry on Gastrointestinal Transit and Absorption following Oral Administration
Authors: Dong Li, Jie Zhuang, Haisheng He, Sifan Jiang, Amrita Banerjee, Yi Lu, Wei Wu, Samir Mitragotri, Li Gan, Jianping Qi
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Mesenchymal stem cells increase skin graft survival time and up-regulate PD-L1 expression in splenocytes of mice
Authors: Ali Moravej, Bita Geramizadeh, Negar Azarpira, Amir-Hasan Zarnani, Ramin Yaghobi, Mehdi Kalani, Maryam Khosravi, Amin Kouhpayeh, Mohammad-Hossein Karimi
Journal: Immunology Letters (2017)

Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model
Authors: Ayesha B Alvero, Dongin Kim, Eydis Lima, Natalia J Sumi, Jung Seok Lee, Carlos Cardenas, Mary Pitruzzello, Dan-Arin Silasi, Natalia Buza, Tarek Fahmy
Journal: Scientific Reports (2017)

On-Demand Drug Releasing from Dual Targeting Small Nanoparticles Triggered by High Intensity Focused Ultrasound Enhanced Glioblastoma Targeting Therapy
Authors: Zimiao Luo, Kai Jin, Qiang Pang, shun shen, Zhiqiang Yan, Ting Jiang, Xiaoyan Zhu, Lei Yu, Zhiqing Pang, Xinguo Jiang
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Overexpression of c-Met in bone marrow mesenchymal stem cells improves their effectiveness in homing and repair of acute liver failure
Authors: Kun Wang, Yuwen Li, Tiantian Zhu, Yongting Zhang, Wenting Li, Wenyu Lin, Jun Li, Chuanlong Zhu
Journal: Stem Cell Research & Therapy (2017): 162

The accelerated blood clearance phenomenon of PEGylated nanoemulsion upon cross administration with nanoemulsions modified with polyglycerin
Authors: Yuqing Su, Lirong Wang, Kaifan Liang, Mengyang Liu, Xinrong Liu, Yanzhi Song, Yihui Deng
Journal: Asian Journal of Pharmaceutical Sciences (2017)