绿色荧光示踪探针 CytoTrace Green CMFDA

绿色荧光示踪探针 CytoTrace Green CMFDA是美国AAT Bioquest生产的荧光示踪探针，CytoTrace Green CMFDA是对CellTracker Green CMFDA（Invitrogen C2925，CellTracker 是Invitrogen的商标）的极好替代品。CMFDA荧光探针保留了FITC的光谱特性，因此通常可以使用荧光显微镜或流式细胞仪检测其信号。它可以自由地穿过细胞膜，并在与细胞成分反应后转化为细胞不渗透的产物。细胞不渗透的反应产物通过几代传递给子细胞，但不转移到群体中的相邻细胞。装载Cytotrace Green探针的细胞通常是荧光的，可存活至少24小时，使该探针成为优异的长期细胞示踪剂。，为您提供优质的绿色荧光示踪探针CytoTrace Green CMFDA CAS 136832-63-8。 

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操作步骤

准备2-10 mMDMSO储备溶液

对于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的储备溶液（1毫克/毫升，相当于1.8毫摩尔）;

对于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM储备溶液（1毫克/毫升，相当于1.46毫摩尔）;

对于＃22016，加入153μLDMSO以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于1.53mM）;

对于＃22017，加入215uL ml DMSO以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于2.15mM）;

对于＃22020，将4.2mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于~2.4mM）;

注意：应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在< -20 ^o C冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。

 

准备染料工作溶液

在使用之前，通过用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH7）稀释来自步骤1的DMSO储备溶液，制备1至20μM染料工作溶液。通过涡旋混合均匀。

 

用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

3.2离心细胞，每管2-10×10 ^5个细胞。

3.3将细胞重悬于500μL 染料工作溶液中（来自步骤2）。

3.4在室温或37° C 下用染料溶液孵育细胞15至30分钟，避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，得到每管2-10×10 ⁵个细胞。

3.6使用流式细胞仪（FL1通道） 或荧光显微镜监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。

注意：对于细菌细胞染色：当通过测试细菌过夜生长预处理的营养肉汤中1：800稀释储备溶液时，染色是有效的，但也可以使用新鲜牛肉膏或PBS。细菌悬浮液应用PBS稀释至每毫升10 ⁵ -10 ^7个生物。可以通过将1ml溶液施加到.45μm过滤器（25mm）并真空过滤除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室温下孵育5-10分钟来染色细菌。

 

参考文献

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