钙蓝素,AM CAS 168482-84-6

钙蓝素,AM是美国AAT Bioquest生产的细胞渗透性钙黄绿素，它是钙黄绿素的细胞渗透型。进入活细胞后，弱荧光钙黄绿素AM被水解成钙黄绿素，其激发/发射大值与DAPI，Hoechst和AMCA相似。与典型的绿色和红色荧光团（如FITC，TMR和德克萨斯红）的这种特殊光谱分离为多路复用实验提供了额外的选择。因为钙黄绿素AM本身是荧光的，所以可能需要适当的过滤器组和额外的洗涤步骤以使背景荧光小化。我们的钙测定缓冲液可用于有效洗涤细胞外钙黄绿素。，为您提供优质的钙蓝素,AM。 

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选择指南

Dye		Calcein Blue	CytoCalcein™ Violet 450	Calcein UltraBlue™	CytoCalcein™ Violet 500	Calcein UltraGreen™	Calcein	Calcein Orange™	Calcein Red™	Calcein Deep Red™
原理		在活细胞中，非荧光钙黄绿素 AM 在细胞内酯酶的作用下 AM 酯水解后转化为荧光钙黄绿素产物。
荧光效果		活细胞具有高度荧光，很容易与无荧光的死细胞区分开。
Laser(nm)		UV (350)	Violet (405)	UV (350)	Violet (405)	Blue (488)	Blue (488)	Green (532)	Yellow (561-568)	Red (633-647)
Ex/Em(nm)		354/441	406/445	359/458	420/505	492/514	501/521	531/545	562/576	643/663
是否复用		是	是	是	是	是	是	是	是	是
染料相容性		与绿色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与绿色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与绿色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与蓝色和绿色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容	与蓝色和绿色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容
样品类型		活细胞
适用仪器		荧光显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪
货号		22007	22012	21908	22013	21905	22003	22009	21900	22011

 

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荧光显微镜
Ex:	DAPI 滤波片组
Em：	DAPI 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板

 

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荧光酶标仪
Ex:	360 nm
Em：	450 nm
Cutoff：	420 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式：	底读模式

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *储备液。
2.1卡介素蓝量，AM * CAS 168482-84-6 *使用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *与1074.32μL无水DMSO混合。
 

3.用含有10μM钙黄绿素的HHBS制备2X工作溶液，AM * CAS 168482-84-6 * 4，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1Calcein Blue的终孔内浓度，AM * CAS 168482-84-6 *：5μM
3.2Pluronic®F-127的终孔内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议终浓度为Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1此步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调整为以下：5μM钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，0.04％Pluronic®F-127,1 mM丙磺舒。

 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 360/445 nm运行实验。

 

参考文献

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