钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐

钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，Cal-520 在探测细胞内钙离子方面提供了一个荧光分析工具。 Cal-520 AM是新型的钙离子荧光染料相比现在还在应用的绿色钙离子荧光指示剂(例如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM)在信噪比和细胞内滞留方面有着显著的改进。G蛋白偶联受体或者.钙离子通道可以被 Cal-520 AM 通过细胞膜标记钙离子而预先加载。 Cal 520 AM 一旦进入细胞内，其亲脂基团就会被剪切酶水解成一个带阴性负离子的荧光染料被阻断在细胞内。它与钙离子结合其荧光就会显著的增强。当细胞内的细胞器受到刺激就会释放出钙离子， Cal-520 的荧光信号就会显著的增加。长波长、高灵敏性、大于100倍的荧光信号增强使得 Cal-520 AM成为一个理想的细胞内钙离子测量指示器。高的信噪比和极好的细胞内滞留使得Cal-520 在测评 GPCR 和钙离子通道目标及他们的受体激动剂和拮抗剂的筛选方面相比其他钙离子探针显现更加优越性。 Cal-520 钠盐或者钾盐是在细胞内水解了的 Cal-520 AM。它选择性的与钙离子结合，它的荧光强度与钙离子浓度正向相关。相比其他 Cal-520 指示器 Cal-520FF 具有小的钙离子亲和力他用以标记 Kd ~ 10 uM单位的钙离子。，为您提供优质的钙离子荧光探针Cal-520FF, 钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520FF，AM原液。
2.1Cal-520FF ，AM的用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Cal-520FF ，AM与439.01μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMCal-520FF ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度为Cal-520FF ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal-520FF TM，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Cal-520FF™的终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至以下：5μMCal-520FF，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/514 nm运行实验。

 

参考文献

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