StrandBrite 绿色RNA定量试剂*200X DMS

StrandBrite 绿色RNA定量试剂是美国AAT Bioquest生产的用于定量RNA的试剂，检测和定量少量RNA对于多种分子生物学程序极为重要，例如在进行Northern blot分析，S1核酸酶测定，RNase保护测定，cDNA文库制备，反向操作之前，测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度。转录PCR和差异展示PCR。测量核酸浓度常用的技术是测定260 nm的吸光度。基于吸收率的方法的主要缺点是蛋白质，游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物引起的干扰。使用敏感的荧光核酸染色剂可缓解此干扰问题。StrandBrite RNA定量试剂是一种超灵敏的荧光核酸染料，用于定量溶液中的RNA。StrandBrite RNA定量试剂可通过荧光酶标仪或荧光计检测低至5 ng / mL的RNA。，为您提供优质的StrandBrite 绿色RNA定量试剂。 

样品实验方案

溶液配制

工作溶液配制

1.准备StrandBrite 工作溶液：

1.1  准备的水溶液工作溶液StrandBrite 绿色通过在TE浓缩DMSO溶液的200倍稀释液（在DEPC的10mM的Tris-HCl，1mM的EDTA，pH 7.5中经处理的水）。例如，添加50μL StrandBrite 绿色 至10mL TE缓冲液，以制备足够的工作溶液在200至100个测定样品 μ L终体积。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注意1：我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备此溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注意2：为获得佳结果，应在准备后的几个小时内使用此溶液。

 

标准液配制：

1.准备RNA标准液的系列稀释液（0到1µg / mL ）：

1.1准备一个100 μ 克/ mL储备在RNA的溶液DEPC处理过的水。

1.2添加10μL 100 μ 克/毫升RNA储备溶液（来自步骤2.1） ，以490 μ 大号测定缓冲液（成分B）为具有2 微克/ mL的RNA溶液，然后执行1：2系列稀释来获得1000， 500、250、125、62.5、31.3、15.6和0 ng / mL。

1.3如表1和表2所述，将RNA标准品和含RNA 的测试样品添加到96孔黑色固体微孔板中。

 

表1黑色固体96孔微孔板中RNA标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS
RS1	RS1	...	...
RS2	RS2	...	...
RS3	RS3
RS4	RS4
RS5	RS5
RS6	RS6
RS7	RS7

注：RS = RNA 标准；BL =空白控制；TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

RNA标准	空白对照	测试样品
连续稀释（100ul）	TL:100ul	100ul

注：将从15.6到1000 ng / mL的RNA标准品的系列稀释液一式两份地添加到DS1到DS7的孔中。

 

运行RNA assay分析：

1.将100μLStrandBrite Green工作溶液（来自步骤2）添加到RNA标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3）的每个孔中，以使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔添加25μL样品和25μLStrandBrite Green工作溶液。

2.在避光的条件下，将反应在室温下孵育5至10分钟。

3.用分光荧光计在Ex / Em = 490/525 nm （在515 nm 处截止）监测荧光的增加。

注意：为使光漂白效应小化，请对所有样品保持恒定的荧光测量时间。

4.用空白孔（仅含测定缓冲液）中的荧光作为对照，并从具有RNA标准液或测试样品的比色皿中减去。RNA样品的浓度根据RNA标准曲线测定。

 

参考文献

Inhibitors of Streptococcus pneumoniae surface endonuclease EndA discovered by high-throughput screening using a PicoGreen fluorescence assay
Authors: Peterson EJ, Kireev D, Moon AF, Midon M, Janzen WP, Pingoud A, Pedersen LC, Singleton SF.
Journal: J Biomol Screen (2013): 247

Validation of a PicoGreen-based DNA quantification integrated in an RNA extraction method for two-dimensional and three-dimensional cell cultures
Authors: Chen Y, Sonnaert M, Roberts SJ, Luyten FP, Schrooten J.
Journal: Tissue Eng Part C Methods (2012): 444

Characterization of PicoGreen interaction with dsDNA and the origin of its fluorescence enhancement upon binding
Authors: Dragan AI, Casas-Finet JR, Bishop ES, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: Biophys J (2010): 3010

Comparison of SYBR Green I-, PicoGreen-, and [3H]-hypoxanthine-based assays for in vitro antimalarial screening of plants from Nigerian ethnomedicine
Authors: Abiodun OO, Gbotosho GO, Ajaiyeoba EO, Happi CT, Hofer S, Wittlin S, Sowunmi A, Brun R, Oduola AM.
Journal: Parasitol Res (2010): 933

Metal-enhanced PicoGreen fluorescence: application to fast and ultra-sensitive pg/ml DNA quantitation
Authors: Dragan AI, Bishop ES, Casas-Finet JR, Strouse RJ, Schenerman MA, Geddes CD.
Journal: J Immunol Methods (2010): 95

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen dye
Authors: Moreno LA, Cox KL.
Journal: J Vis Exp. (2010)

Development and characterization of a novel host cell DNA assay using ultra-sensitive fluorescent nucleic acid stain "PicoGreen"
Authors: Ikeda Y, Iwakiri S, Yoshimori T.
Journal: J Pharm Biomed Anal (2009): 997

Enhanced DNA dynamics due to cationic reagents, topological states of dsDNA and high mobility group box 1 as probed by PicoGreen
Authors: Noothi SK, Kombrabail M, Kundu TK, Krishnamoorthy G, Rao BJ.
Journal: FEBS J (2009): 541

Factors affecting quantification of total DNA by UV spectroscopy and PicoGreen fluorescence
Authors: Holden MJ, Haynes RJ, Rabb SA, Satija N, Yang K, Blasic JR, Jr.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 7221

Label-free DNA sequence detection with enhanced sensitivity and selectivity using cationic conjugated polymers and PicoGreen
Authors: Ren X, Xu QH.
Journal: Langmuir (2009): 43