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- 2026年04月01日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
ReadiLink™ Biotin Nick Translation dsDNA Labeling Kit
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
10Reactions
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
ReadiLink 生物素 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法，可以使用明亮且光稳定的 生物素染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链，生物素染料与之结合。此外，该试剂盒允许用户通过调整 生物素-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容，包括人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 生物素标记 DNA 可用于多种分子生物学技术，例如荧光原位杂交 (FISH)。，为您提供优质的ReadiLink 生物素缺口平移 dsDNA 标记试剂盒。
样品实验方案
简要概述
- 准备 DNA 样本
- 向试管中加入试剂
- 短暂混合并离心
- 在 15°C 下孵育 60 分钟
- 将反应置于冰上，然后加入停止溶液并在 65°C 下加热
- 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
- 纯化标记的 DNA
注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。
实验步骤
表 1. 各反应每管试剂组成
| 成分 | 规格 |
| DNA样本 | 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL |
| Nick Translation 缓冲液 | 5 µL |
| dNTP 混合物 | 5 µL |
| dTTP | 2 µL |
| 生物素-dUTP 工作溶液 | 2 µL |
| DNA聚合酶I | 1 µL |
| DNA酶I | 1 µL |
| 总容积 | 50 µL |
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记，但可能会缩短终产品的尺寸。
1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后，将反应置于冰上。
5.要终止反应，请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。
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文献和实验公司的Atlas Pure Total RNA Labeling System： 这是一个从Total RNA中制备同位素标记的cDNA探针的试剂盒。利用生物素偶联的Oligo（dT）和磁珠偶联的Streptavidin将mRNA吸附到磁珠上，加入MacroArray（包括尼龙膜基质和塑料基质）提供的基因特异引物混合物（CDS Primer）、同位素标记物和逆转录酶，直接在磁珠上合成同位素标记的cDNA探针，最后从磁珠上洗脱标记好的探针，纯化后即可用于杂交。这个标记试剂盒可以从少至10μg
Chemiluminescent Hybridization & Detection Kit），即可组合出完整的非放射性检测分析系统。不过这个系统不适用于玻片基质的芯片的探针标记。 由于Atlas系列的DNA微阵列膜上每个点的核酸量有限，所以对标记探针的灵敏度要求非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将2μg以上的mRNA或者50μg以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记
P标记的脱氧核苷三磷酸，经DNA聚合酶作用掺入DNA。Bio-dUTP代替dTTP,Bio-dATP代替dATP，Bio- dCTP代替dCTP。Bio –11-dUTP的11是指生物素基团与脱氧核苷酸之间连接臂的碳链长度。常用的酶促生物素标记DNA的方法有缺口平移法和随机引物延伸法。 3．寡核苷酸的生物素末端标记 有5’-磷酸的化学标记法和3’-OH的酶促标记法。前者将寡核苷酸的5’-磷酸接上一个乙二胺，然后用琥珀酰亚胺生物素，将生物素基团连接在磷酸酰胺基上。后者是用末端转移将Bio
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