Amplite 比色法尿素定量试剂盒 蓝色

Amplite 比色法尿素定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。尿素是动物蛋白质和氨基酸代谢的终降解产物。它在肝脏中产生，由肾脏分泌并通过尿液排泄。尿素的测定在临床实验室中用于监测健康状况是非常有用的。血尿素氮（BUN）测试是尿素形式的血液中氮的量的量度，主要用于肌酸酐测试，以评估肾功能，帮助诊断肾脏疾病。我们的Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单灵敏的比色法，用于定量生物样品中的尿素浓度，如血清，血浆和尿液等。该分析基于尿素在分析缓冲液中的酶偶联反应，后生产出蓝色的产品。产生的颜色强度与样品中尿素的浓度成比例，其可以在660-670nm处比色测量。这种Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单的分析方法，可在150μL分析体积中检测低至10μM的尿素。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。，为您提供优质的Amplite 比色法尿素定量试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	665nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备尿素标准品或测试样品（50μL）
2.添加尿素工作液（50μL）
3.在室温或37°C孵育30-60分钟
4.添加分析缓冲液II
5.读取665 nm处的吸光度

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Assay Enzyme Mix储备液（100X）：
将100μLddH2 O加入到测定酶混合物（组分A）的小瓶中以制备100X测定酶混合物储备溶液。

 

2.标准溶液

2.1尿素标准
将1μL1.0M尿素标准品（组分D）加入999μLDPBS中以产生1.0mM标准尿素溶液（US7）。 取1.0mM尿素标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的尿素标准溶液（US6-US1）。

 

3.工作溶液

将50μL重构的测定酶混合物储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液I（组分B）中以制备尿素工作溶液。 注意：尿素工作溶液应及时使用，避光。 随着储存时间的延长，测定灵敏度会降低。 建议使用新鲜尿素工作溶液以获得佳效果。

 

样品分析

表1.透明底部96孔微孔板中尿素标准品和测试样品的布局。 US =尿素标准（US1-US7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
US1	US1	...	...
US2	US2	...	...
US3	US3
US4	US4
US5	US5
US6	US6
US7	US7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
US1-US7	50ul	连续稀释液（1至1000μM）
BL	50ul	DPBS
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备尿素标准品（US），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向尿素标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL尿素工作溶液，使总尿素测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL尿素工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温或37°C下孵育反应30-60分钟，避光。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分C），使得总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每个孔中加入25μL测定缓冲液II（组分C），总测定体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育10-15分钟，并使用吸光度酶标仪监测660-670nm处的吸光度增加。注意：添加分析缓冲液II（组分C）后颜色变为黄色，孵育后尿素标准品或样品孔将显示蓝绿色。颜色的强度将在15-30分钟内达到大值，并且与尿素的浓度成比例。注意：终颜色在室温下稳定约1小时，颜色强度会随时间降低。

 

参考文献

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