M5尾-BP

HeliScope测序仪

HeliScope测序仪是由Quake团队设计开发的，它实际上也是一种循环芯片测序设备。不过，HeliScope 测序仪最大的特点是无需对测序模板进行扩增，它使用了一种高灵敏度的荧光探测仪直接对单链DNA模板进 行合成法测序。首先，将基因组DNA切割成随机的小片段DNA分子，并且在每个片段末端加上poly-A尾。然 后通过poly-A尾和固定在芯片上的poly-T杂交，将待测模板固定到芯片上，制成测序芯片。最后借助聚合酶 将荧光标记的单核苷酸掺入到引物

甲基化酶（Methylase）的种类及其对限制性酶切的影响

E.coli 中至少有 3 种依赖于甲基化的限制系统 mcrA、 mcrBC 和 mrr ，它们识别的序列各不相同，但只识别经过甲基化的序列，都限制由 CpG 甲基化酶(M SssⅠ)作用的 DNA (限制即消化降解)。 Mrr 限制 m6A ; McrA 限制 HpaⅡ 甲基化修饰的位点; McrBC 切割两套半位点(G/A)mC ，这两套位点之间间隔 2kb ，最适为 55～103bp ，需 GTP ;大多数常用的 E.coli 都含这三个限制系统中的一个或几个，三个都不限制 Dcm 修饰的位点

逆转录、qPCR 实验还出错？这几点你可能没注意！

可以获得真核生物 mRNA 全长；当 RNA 没有 polyA 尾（原核 mRNA 或 rRNA）或断裂时，就需要考虑使用随机引物进行 RNA 的反转录，随机引物可以很均一的逆转出 RNA 上的信息，但逆转出的 cDNAs 长度都较短。此时，对于扩增真核生物的 total RNA 来说，这时随机引物和 Oligo-dT 引物的混合物能给出一个令人满意的结果。 诺唯赞的 HiScript® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)（R312）或可助