干冰运输；24：1辅酶A

全新发布：外泌体样本收集指南

。 4、低温原则 所取样本离体后，应尽快置于干冰或 -80℃ 冰箱中，并保证在实验前始终处于 -70℃ 以下， 以避免外泌体降解。 二、样本制备指南 1、细胞上清 1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在 70%-80%，悬浮细胞密度在 60%-70%； 2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除血清；对于悬浮细胞，300 g ，4℃，10 min 收集细胞，然后换为新的不含外泌体的培养基或者无血清替代培养基继续培养 24-48 h， 根据细胞

胆汁（bile）

　　由肝细胞生成的一种液体。生成后由肝管排出，经总胆管流入十二指肠，在非消化期间，胆汁由肝管流入胆囊而贮存，当消化时再由胆囊排出经总胆管而流至十二指肠。胆汁为一种较浓的、具苦味的有色汁液，正常人24小时内分泌量为300～700毫升。从肝脏初期分泌的胆汁称肝胆汁，呈金黄色或黄褐色，固体物含量较少，比重接近1.009，弱碱性（pH7.4）。肝胆汁进入胆囊后，其中水、盐和其他一些成分不断被胆囊吸收，从而使胆汁浓缩，成胆囊胆汁，比重约1.032左右，并由于碳酸氢盐重新被吸收而呈弱酸

初级胆汁酸的生成

，是最主要的变化。首先在7α-羟化酶催化下，胆固醇转变为7α-羟胆固醇，然后再转变成鹅脱氧胆酸或胆酸，后者的生成还需要在12位上进行羟化。 (2)侧链氧化断裂生成含24个碳的胆烷酰CoA和一分子丙酰CoA(需ATP和辅酶A)。 (3)胆固醇的3-β-羟基差向异构化，转变为3-α-羟基。 (4)加水，水解下辅酶A分别形成胆酸与鹅脱氧胆酸。胆酰CoA和鹅脱氧胆酰CoA也可与甘氨酸或牛磺酸结合，生成结合型胆汁酸。 上述反应中，第一步(7α-羟化)是限速步骤，7α-羟化酶是限速