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- 2025年12月24日
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上海达为科生物科技有限公司
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乙肝动物模型
一、模型分类及核心特征
（一）按物种与构建原理分类
| 模型类型 | 代表模型 | 构建原理 | 优势 | 局限性 |
|---|---|---|---|---|
| 灵长类模型 | 黑猩猩 | 天然易感HBV，直接感染临床病毒株 | 病理进程最接近人类，免疫应答完整 | 伦理限制严，成本高昂（>$50万/只），已禁用 |
| 人源化小鼠模型 | FRG/FRGN小鼠 | 移植人肝细胞至免疫缺陷鼠肝内（嵌合率>70%） | 支持HBV完整生命周期，适合药物筛选 | 免疫缺陷，无肝炎病理，需持续免疫抑制 |
| AFC8双嵌合模型 | 联合移植人肝细胞与人造血干细胞 | 模拟免疫应答，可研究免疫清除机制 | 技术复杂，嵌合稳定性差（<6个月） | |
| 转基因小鼠模型 | HBV-Tg小鼠 | 整合HBV全基因组或部分片段 | 稳定表达病毒抗原，成本低，适合免疫耐受研究 | 无cccDNA形成，感染非自然发生 |
| 病毒转染模型 | rAAV-HBV | 重组腺相关病毒递送HBV基因组至肝细胞 | 快速建立高病毒载量（>10⁸ copies/mL） | 瞬时表达（<12周），免疫原性干扰 |
| 化学诱导模型 | Tg/rAAV + CCl₄ | 转基因/病毒载体联合四lv化碳诱导纤维化 | 同步模拟HBV感染与肝纤维化 | 纤维化程度不均，毒性大 |
注：人源化模型占近5年研究主导（>60%），因可支持cccDNA研究（治愈关键靶点）
二、关键模型构建技术详解
（一）人源化肝嵌合模型标准化流程
- 肝损伤预处理：
- FRG小鼠（Fah⁻/⁻, Rag2⁻/⁻, Il2rg⁻/⁻）口服NTBC抑制剂（1周）诱导肝细胞凋亡
- 人肝细胞移植：
- 脾脏注射2×10⁶个原代人肝细胞（PHH）或iPSC分化的肝样细胞（iHeps）
- 嵌合率验证：
- 血清人白蛋白>1 mg/mL 或 肝组织人特异性标志物（hAlb+）>50%
（二）HBV感染诱导方案
| 感染方式 | 病毒量 | 监测指标 | 周期 |
|---|---|---|---|
| 尾静脉注射HBV | 1×10⁷ GEQ/mouse | HBsAg/HBeAg阳性（感染后2周） | 8-12周 |
| 高压注射HBV质粒 | 10μg pAAV-HBV1.3 | 血清HBV DNA>10⁷ copies/mL（峰值7天） | 4-6周 |
（三）肝纤维化复合模型构建
- Tg+CCL₄方案：
- HBV-Tg小鼠 + 腹腔注射40% CCl₄油剂（0.2mL/100g，2次/周×9周）→ 纤维化分期F3-F4
- rAAV+CCL₄方案：
- 优势：病毒载量灵活调控（rAAV剂量依赖），纤维化进展更快（6周成模）
三、核心评价指标与验证方法
（一）病毒学指标
| 指标 | 检测方法 | 临床意义 | 模型适用性 |
|---|---|---|---|
| cccDNA | qPCR+PSD处理 | 病毒持续感染标志，治愈核心靶点 | 仅人源化模型可检测 |
| HBsAg/HBeAg | ELISA/化学发光 | 病毒复制活跃度 | 所有模型适用 |
| HBV DNA | 实时荧光PCR | 病毒载量直接反映 | 所有模型适用 |
（二）病理学评估
- 组织染色：
- H&E：炎性浸润（CD8+T细胞灶状浸润）
- 天狼星红：胶原沉积半定量（纤维化分期）
- 评分系统：
- Ishak评分：评估肝炎活动度（0-18分）
- METAVIR分期：纤维化程度（F0-F4）
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