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文献和实验完毕取出杯子并立即加入1 ml SMMP溶液(含有亚浓度的相应抗生素)。温和地将其转移至试管(17×100 mm)中,37℃,250 rpm,复苏 1h。 2.8 查看和记录电击参数,时间常数应该在2.5 ms左右,记录场强(kV/cm)。 2.9 涂布相应的LB抗性平板,37℃培养36~48 h。 3 溶液和试剂 3.1 B2培养基:水解酪蛋白10 g,酵母粉25 g,葡萄糖5 g,NaCl 5 g,K2HPO4 1 g,加900 ml去离子水,调pH值到7.5,定容至1 l,灭菌
是:甲醛固定细胞---收集细胞,将染色质复合物中 DNA 切割---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA 复合物相互结合---加入 Protein A 或 Protein G 微珠,结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA 复合物---解交联,纯化富集的 DNA 片段---PCR 或测序分析。随着 ChIP 技术的不断优化,在对甲醛固定的染色质复合物中 DNA 进行切割时,传统超声随机打断 DNA 的方法逐渐被酶解
solution, e.g. 0.1% Triton X-100 at 37°C for one minute. Re-equilibrate immediately with at least 5 bed volumes of binding buffer. 8. Storage Benzamidine Sepharose 6B should be stored at 4�8°C in the presence of a suitable bacteriostatic agent, e
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