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文献和实验1 ml 2.4 中准备好的 Biotin Elution Buffer,让液流完全进入胶体后孵育 2 min,加入 9 ml 的 Biotin Elution Buffer; 1.13 对于从全血中分选目的细胞,再加入 10 ml 的 Biotin Elution Buffer; 1.14 300 g 转速离心 10 分钟,收集洗脱目的细胞。 流程图: 2. 实验数据 以下流式图为从 7.5 ml 全血中,选出 CD3 + T 细胞的数据。选后细胞以 CD3 -APC (OKT
、CD14-PE、CD19-PE、CD3-PE、CD66b-PE、CD56-PE-Cy7、CD11c-APC、 CD45-AF700、CD38-APC-AF750(每次测试 5μL),以及 CD16-FITC(每次测试 20 μL),并在冰上孵育 30 分钟。10. 在 4℃ 条件下,300 x G 离心细胞 5 分钟。11. 吸取上清液。12. 重悬到 500 μL 染色缓冲液中。13. 通过 CytoFLEX 获取结果。通过 CytoFLEX 进行数据采集:1. 创建新补偿值。2. 如适用
AUTOMACS系统自动分选体系分选小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞
PE磁珠 9. 完全RPMI培养基 10. 小鼠CD3+ T细胞富集柱和1×纯化柱缓冲液 11. 15ml离心管,无菌 12. autoMACS系统和分选柱 13. 30mm尼龙网或40mm预分离滤膜 实验方法: 1. 用20只小鼠的淋巴结制备单细胞悬液并去除红细胞。 2. 将细胞在20mlHBSS洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数
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