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文献和实验Using Phospho‐Motif Antibodies to Determine Kinase Substrates
Figure 18.20.1 The specificity of phospho‐motif antibodies. HeLa cells were serum‐starved for 24 hr prior to being stimulated with 50 ng/ml IGF‐1 or 100 nM PMA for 10 min. Lysates were immunoblotted with anti‐Akt/PKB phospho‐motif (left panel
碧峤 wrote: pAkt有两个位点,Ser473和Thr308,其中Ser473相对容易显色。如果显色失败,可能的原因:1 上样量过少,我们一般都是30μg;2 一抗孵育时间过短,我们一般24h~48h;3 一抗是否工作有待排除 我上样量上的15ug,一抗孵育大约18个小时,就是头天下午孵育上,第二天早上就洗膜了,之前做过一次pakt,一样的过程,出了一次,再以后就没出了。今天我们换了下不同组的同一组织,比较新,试下,不知道明天出不出
即可损伤细胞;对可兴奋细胞和非兴奋细胞均可产生多重效应;在Swiss 3T3纤维原细胞中激活SAPK/JNK通路;去极化心脏及平滑肌的兴奋细胞,增加胞内Ca2+浓度;与钠、钾泵结合从而抑制Na+、K+-ATP酶活性,促进K+外流;也是阳离子载体和非TPA肿瘤促进因子。 25ug 100ug 232. 3650
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