Mouse Complement Component C5a

Mouse Complement Component C5a ELISA kit，Valukine™

产品信息及操作手册
小鼠 Complement Component C5a ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL628
适用于定量检测天然和重组小鼠 Complement Component C5a 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

I. 背景
小鼠补体5a (C5a)是酶促反应产生的糖蛋白，属于结构和功能相关的过敏毒素蛋白家
族。C5a是由补体第五成分(C5) α链上的C5a转化酶活性产生的77个氨基酸(aa)肽(1,2)。
它具有4个α -螺旋，加上3个链内二硫键形成的三环结构(3)。小鼠C5a与人类和大鼠C5a
的同源性分别为60%和82%。
C5a结合的受体有两种，第一种结合受体是CD88(4,5)，它属于七次跨膜受体家族，
通过G蛋白依赖和非依赖途径发出信号(6)。CD88与C5a相互作用是通过两个位点结合过
程，从而在两个不同且物理上分离的位点发生结合。第一个“识别”位点位于受体的胞外氨
基末端(N-端)，与C5a N-端和二硫键连接的核心结合。第二个“激活”位点是由受体的跨膜
结构域形成的，与C5a的C-端相互作用，并导致受体偶联G蛋白介导的特定信号转导通路
的产生(7)。小鼠CD88基因缺失可防止类风湿关节炎和免疫复合物肺泡炎等免疫复合物疾
病的发生，以及延迟型超敏反应(8-10)。第二种C5a结合受体是C5L2，它也属于七次跨膜
受体家族(11,12)。C5L2在大多数与CD88相同的细胞类型上表达，如中性粒细胞、单核
细胞、淋巴细胞和巨噬细胞，以及非髓系细胞如血管平滑肌细胞(13)。与CD88不同，C5L2
与C5a高亲和力结合，与G蛋白解耦联，并且缺乏受体内化(14)。在小鼠中，C5L2可以作
为C5a信号传导的正调节因子(15)。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠C5a抗体包被于微孔板上，样本和标准品中
的小鼠C5a会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗小鼠
C5a检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物
酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的小鼠C5a成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和小鼠血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验员的操作、移液器的使用方式、洗板技
术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠C5a，测定其回收率。回收率范围在
85.6-96.1%，平均回收率在92.1%。
C. 灵敏度
小鼠C5a的最低可测剂量（MDD）一般小于0.47 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组小鼠C5a蛋白所校
正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的小鼠C5a，然后用标准品稀释液（1×）将样本稀释到检
测范围内，测定其线性。

F. 样本预值
血清样本 - 使用本试剂盒检测了4份小鼠血清样本中C5a的水平。4份样本的检测值在
134.5 -505.0 ng/mL之间，平均值为270.9 ng/mL。
G. 特异性
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant mouse： Recombinant human：
Complement Component C3d Complement Component C3a
Complement Component C5a
Natural proteins:
Human a2-Macroglobulin