(Acetylindole 4264-35-1 **科研

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附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 一、对起草单位的要求： 1．HPLC法用于药品的有关物质检查或含量测定时，需提供建立HPLC法的依据及参考文献。 2．应对建立的方法进行论证，按照中国药典2000年版二部凡例与附录收载的药品质量标准分析方法验证项下所列的要求进行试验。 3．建立方法时，应考虑下列事项： ①首选填料为十八烷基键合硅胶，并至少对两根不同品牌的色谱柱进行比较试验，其中一根为国产柱。 ②流动相首选甲醇-水系统，应

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和极性较弱的化合物可选择非极性键合相。利用特殊的反相色谱技术，例如反相离子抑制技术和反相离子对色谱法等，非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。ODS(octadecyl silane)是应用最为广泛的非极性键合相，它对各种类型的化合物都有很强的适应能力。短链烷基键合相能用于极性化合物的分离，而苯基键合相适用于分离芳香化合物。 另外，美国药典对色谱法规定较严，它规定了柱的长度，填料的种类和粒度，填料分类也较详细，这样使色谱图易于重现；而中国药典仅规定填料种类，未规定柱的长度和粒度

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9］用RP-HPLC从人体胎盘中分离出40S核糖体蛋白。每一色谱组分都用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE) N-端测序进行鉴别。N-端封闭的蛋白用内蛋白酶赖氨酸-C切割，然后对合适的肽段测序。用此法可对HPLC洗脱出的40S人体核糖体亚单元中所有蛋白进行鉴定。 　　ESI-MS用于短肽链高灵敏度测序，由于技术的困难，该法不能分析从凝胶中离析的蛋白质。Wilm等［10］介绍了一种从PAGE中离析的蛋白质进行测序的简便有效的方法纳克级电喷雾***质谱法。用此方法低至5 ng的蛋白都可被测序