- ￥1000
- 烜雅生物
- XY-ZL0177
- 国产
- 2026年01月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
150
- 英文名：
pHY300PLK
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pHY300PLK
形式：质粒干粉
参考用途：pHY300PLK 是一种E. coli-B. subtilis共培载体，含有抗生素抵抗基因，适用于克隆和表达。
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α）
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验法：1.5kGy 的辐射可完全破坏0.1ng 基因组DNA，2.0 kGy 可破坏104 拷贝的质粒分子，4.0 kGy 仍不影响PCR，但高于此限度会使PCR 扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR，g 射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA 的。 （三）尿嘧啶糖苷酶（UNG）法 由于UV 照射的去污染作用对500bp 以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR 扩增片段通常为300bp 左右，因此UNG 的预防作用日益受到重视和肯定。 1）原理：在PCR 产物或引物中用dU 代替dT.这种dU
新的1.5ml EP管中，将300ul水或TE（如果使用TE溶解质粒，将可能抑制某些酶的活性）加入Midicolumn中，静置1min，以10,000g离心20sec洗脱DNA。 弃去Midicolumn。对于大于10kb的质粒，应将水或TE预热至65-70℃以提高产量，对于大于20kb的质粒， 应将水或TE预热至80℃。一般大小的质粒可以保存在下段中长达30min，但大于20kb的质粒会出现缺刻。以10,000g离心5min，沉淀洗脱的质粒溶液中可能残留的树脂粉末，将上清转移至一个新EP管中
μl +180μl NaCl(0.9％) 1:100000 1:1000; 1:10000；1:100000 三种浓度各取100μl 涂布SD/-Trp/-Leu 平板 20) 转库效率的计算：对生长在SD/-Trp/-Leu 平板上的克隆计数，挑选克隆数在 30-300 之间稀释度计算转库效率 转库效率计算实例： .. 在1：10000 转库效率计数平板上长出100 个克隆(稀释度=0.0001) .. 总悬浮体积= 5ml .. 文库质粒用量=100μg 转库
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