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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
10
- 英文名:
Escherichia coli DH5α(pEC-XK99E )
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
冻干粉
英文名称:Escherichia coli DH5α(pEC-XK99E )
形式:冻干粉
参考用途:pEC-XK99E 质粒提取。
培养基:酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃)
生长条件:37℃;18-24h;好氧
存储条件:2-8℃
安全等级:1
操作步骤:
①准备1支含有5~10mL液体培养基的试管和2个平板;
②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;
③吸取0.5mL液体培养基打入冻干管,充分溶解后重新打回液体试管中,混匀;
④吸取0.2mL菌悬液打入平板中,涂布均匀,重复两次获得两个平板;
⑤将液体试管和平板全部置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
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文献和实验后,不能稳定地共存于细菌的一个单细胞中,称之为不相容性质粒。例如:带有ColEl和pMBl复制子的质粒彼此不相容;而带有pSC101和p15A复制子的质粒却彼此相容。(3)转移性:在自然条件下,许多质粒都能通过细菌结合作用转移到新宿主菌内,而质粒上的mob基因为转移所必需的基因;同时在质粒上还需要nic/bom位点。(4)赋予宿主细胞一些遗传表型,如对抗生素的抗性。 mnidr 谢谢版主,那请问一下,原始的野生型大肠杆菌含有质粒吗?含有的是一种还是几种质粒呢?是固定
需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上,或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒,一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源:QIAGEN 凯杰
系列):高拷贝会导致大片段质粒复制压力大,易丢失或断裂,优先用低拷贝载体(如 pACYC184,拷贝数 10-15)或大片段专用载体(如 BAC 载体 pBeloBAC11,可容纳 100kb 以上片段,在大肠杆菌中稳定存在); ④选择合适的连接方法,比如 Gibson 组装(无缝克隆)的方法更适合 10-20kb 大片段的连接,相比传统的 T4 连接的方法,成功率更高,操作更简便; ⑤选择重组缺陷型感受态,提高大质粒的转化效率,如 Stbl3、DH10B 等,此外转化方式也会影响转化
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