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乙醇诱导肝纤维化大小鼠模型构建

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  • 乙醇诱导肝纤维化大小鼠模型构建
  • 上海
  • 2026年01月20日
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      上海申知心生物科技有限公司

    • 服务名称

      乙醇诱导肝纤维化大小鼠模型构建

    、模型选择与实验设计

    1. 动物选择

    参数小鼠(Mouse)大鼠(Rat)
    推荐品系C57BL/6(乙醇敏感)Wistar/SD(稳定性高)
    性别雄性(避免雌激素干扰)雄性
    周龄/体重8-12周(20-25g)6-8周(180-220g)
    造模周期4-8周(慢性)6-12周(慢性)

    2. 模型策略

    • 慢性模型:Lieber-DeCarli液体饲料(乙醇渐进暴露,模拟长期饮酒)。

    • 急性-慢性模型(Gao-Binge):液体饲料+间歇性乙醇灌胃(模拟酗酒)。

    • 加速模型:联合肝毒素(如CCl₄,缩短纤维化时间)。


    二、造模方法详解

    1. Lieber-DeCarli液体饲料法(慢性)

    • 适用:小鼠和大鼠(配方需调整热量比例)。

    • 步骤

      1. 适应期(5-7天)

        • 逐步引入含乙醇饲料(小鼠:5%→10%乙醇热量;大鼠:3%→6%)。

        • 对照组:等热量麦芽糊精替代乙醇。

      2. 正式实验

        • 小鼠:35%-40%乙醇热量(约5%液体浓度),自由摄取。

        • 大鼠:30%-35%乙醇热量(约4%浓度),避免拒食。

      3. 周期

        • 小鼠:4周(脂肪变性)→8周(纤维化)。

        • 大鼠:8周(早期纤维化)→12周(显著纤维化)。

    2. Gao-Binge模型(小鼠优选)

    • 步骤

      1. 慢性阶段(5天):Lieber-DeCarli乙醇饲料(5%)。

      2. 急性暴饮(第6天):空腹4h后灌胃31.5%乙醇(小鼠5g/kg;大鼠3g/kg)。

      3. 终点(第10天):检测急性肝损伤(ALT/AST升高)。

    3. 联合CCl₄加速纤维化

    • 方法

      • 每周1次腹腔注射10% CCl₄(橄榄油稀释):

        • 小鼠:0.1mL/10g体重。

        • 大鼠:0.2mL/100g体重。

      • 周期:联合乙醇饲料可缩短至4周(小鼠)或6周(大鼠)。


    三、操作关键点

    1. 乙醇饲料管理

    • 饲料配制

      • 小鼠:乙醇占总热量36%(Lieber-DeCarli标准配方)。

      • 大鼠:降低至30%(避免拒食)。

    • 饲喂方式:每日更换新鲜饲料,避免乙醇挥发。

    2. 乙醇灌胃技巧

    • 浓度

      • 小鼠:31.5%(5g/kg剂量)。

      • 大鼠:20%-30%(3g/kg,耐受性更低)。

    • 注意事项

      • 灌胃前禁食4h,增强吸收。

      • 缓慢推注,避免误吸导致死亡。

    3. 监测指标

    • 行为观察

      • 乙醇组活动减少、毛发蓬松。

      • 体重增长缓慢(乙醇抑制食欲)。

    • 生化检测

      • 血清ALT/AST:每周监测肝损伤。

      • 肝羟脯氨酸:胶原沉积定量(纤维化金标准)。


    四、模型验证

    1. 组织学评估

    染色方法检测目标观察结果
    HE染色脂肪变性、炎症浸润肝细胞空泡化、炎性细胞聚集
    油红O脂滴沉积红色脂滴(早期脂肪变)
    天狼星红胶原纤维(Ⅰ/Ⅲ型)红色纤维网状结构
    α-SMA免疫组化活化的肝星状细胞棕色阳性信号

    2. 分子标志物

    • qPCR/WB

      • 纤维化标志物:TGF-β1、Collagen I、α-SMA。

      • 炎症因子:TNF-α、IL-6。


    五、常见问题与优化

    问题原因解决方案
    动物拒食/体重下降快乙醇浓度过高降低乙醇热量(小鼠30%开始)
    纤维化进展缓慢物种差异(大鼠更耐受)联合CCl₄或胆碱缺乏饲料
    急性死亡(灌胃后)乙醇剂量过大或误吸降低剂量(小鼠3g/kg试起)

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