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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海申知心生物科技有限公司
- 服务名称:
乙醇诱导肝纤维化大小鼠模型构建
、模型选择与实验设计
1. 动物选择
| 参数 | 小鼠(Mouse) | 大鼠(Rat) |
|---|---|---|
| 推荐品系 | C57BL/6(乙醇敏感) | Wistar/SD(稳定性高) |
| 性别 | 雄性(避免雌激素干扰) | 雄性 |
| 周龄/体重 | 8-12周(20-25g) | 6-8周(180-220g) |
| 造模周期 | 4-8周(慢性) | 6-12周(慢性) |
2. 模型策略
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慢性模型:Lieber-DeCarli液体饲料(乙醇渐进暴露,模拟长期饮酒)。
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急性-慢性模型(Gao-Binge):液体饲料+间歇性乙醇灌胃(模拟酗酒)。
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加速模型:联合肝毒素(如CCl₄,缩短纤维化时间)。
二、造模方法详解
1. Lieber-DeCarli液体饲料法(慢性)
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适用:小鼠和大鼠(配方需调整热量比例)。
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步骤:
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适应期(5-7天):
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逐步引入含乙醇饲料(小鼠:5%→10%乙醇热量;大鼠:3%→6%)。
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对照组:等热量麦芽糊精替代乙醇。
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正式实验:
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小鼠:35%-40%乙醇热量(约5%液体浓度),自由摄取。
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大鼠:30%-35%乙醇热量(约4%浓度),避免拒食。
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周期:
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小鼠:4周(脂肪变性)→8周(纤维化)。
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大鼠:8周(早期纤维化)→12周(显著纤维化)。
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2. Gao-Binge模型(小鼠优选)
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步骤:
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慢性阶段(5天):Lieber-DeCarli乙醇饲料(5%)。
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急性暴饮(第6天):空腹4h后灌胃31.5%乙醇(小鼠5g/kg;大鼠3g/kg)。
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终点(第10天):检测急性肝损伤(ALT/AST升高)。
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3. 联合CCl₄加速纤维化
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方法:
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每周1次腹腔注射10% CCl₄(橄榄油稀释):
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小鼠:0.1mL/10g体重。
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大鼠:0.2mL/100g体重。
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周期:联合乙醇饲料可缩短至4周(小鼠)或6周(大鼠)。
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三、操作关键点
1. 乙醇饲料管理
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饲料配制:
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小鼠:乙醇占总热量36%(Lieber-DeCarli标准配方)。
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大鼠:降低至30%(避免拒食)。
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饲喂方式:每日更换新鲜饲料,避免乙醇挥发。
2. 乙醇灌胃技巧
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浓度:
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小鼠:31.5%(5g/kg剂量)。
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大鼠:20%-30%(3g/kg,耐受性更低)。
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注意事项:
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灌胃前禁食4h,增强吸收。
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缓慢推注,避免误吸导致死亡。
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3. 监测指标
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行为观察:
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乙醇组活动减少、毛发蓬松。
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体重增长缓慢(乙醇抑制食欲)。
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生化检测:
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血清ALT/AST:每周监测肝损伤。
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肝羟脯氨酸:胶原沉积定量(纤维化金标准)。
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四、模型验证
1. 组织学评估
| 染色方法 | 检测目标 | 观察结果 |
|---|---|---|
| HE染色 | 脂肪变性、炎症浸润 | 肝细胞空泡化、炎性细胞聚集 |
| 油红O | 脂滴沉积 | 红色脂滴(早期脂肪变) |
| 天狼星红 | 胶原纤维(Ⅰ/Ⅲ型) | 红色纤维网状结构 |
| α-SMA免疫组化 | 活化的肝星状细胞 | 棕色阳性信号 |
2. 分子标志物
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qPCR/WB:
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纤维化标志物:TGF-β1、Collagen I、α-SMA。
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炎症因子:TNF-α、IL-6。
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五、常见问题与优化
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 动物拒食/体重下降快 | 乙醇浓度过高 | 降低乙醇热量(小鼠30%开始) |
| 纤维化进展缓慢 | 物种差异(大鼠更耐受) | 联合CCl₄或胆碱缺乏饲料 |
| 急性死亡(灌胃后) | 乙醇剂量过大或误吸 | 降低剂量(小鼠3g/kg试起) |
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