pACYC184质粒干粉

中文名称：pACYC184质粒干粉

英文名称：pACYC184

形式：质粒干粉

参考用途：pACYC184是一种含有p15A复制起点的大肠杆菌质粒克隆载体，可与ColE1相容性组的质粒共存，是一个低拷贝数载体，可用壮观霉素放大。

培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，琼脂：15.0，氯霉素：50μg/mL，pH：7.0(25℃)

生长条件：LB +氯霉素，37℃（克隆菌株DH5a）

存储条件：2-8℃

安全等级：0

操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。