pECMV-3×FLAG-SCNN1A人源基因质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-SCNN1A人源基因质粒
别称: BESC2;ENaCa;SCNEA;SCNN1;ENaCalpha
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
  pECMV-3×FLAG-SCNN1A(NM_001038.5)是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7495 bp ds-DNA     circular SYN 24-NOV-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7495
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      913..922
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     CDS             1009..3018
                     /codon_start=1
                     /label=SCNN1A
                     /translation="MEGNKLEEQDSSPPQS-TPGLMKGNKREEQGLGPEPAAPQQPTAEE
                     EALIEFHRSYRELFEFFCNNTTIHGAIRLVCSQHNRMKTAFWAVLWLCTFGMMYWQFGL
                     LFGEYFSYPVSLNINLNSDKLVFPAVTICTLNPYRYPEIKEELEELDRITEQTLFDLYK
                     YSSFTTLVAGSRSRRDLRGTLP-HPLQRLRVPPPPHGARRARSVASSLRDNNPQVDWKDW
                     KIGFQLCNQNKSDCFYQTYSSGVDAVREWYRFHYINILSRLPETLPSLEEDTLGNFIFA
                     CRFNQVSCNQANYSHFHHPMYGNCYTFNDKNNSNLWMSSMPGINNGLSLMLRAEQNDFI
                     PLLSTVTGARVMVHGQDEPAFMDDGGFNLRPGVETSISMRKETLDRLGGDYGDCTKNGS
                     DVPVENLYPSKYTQQVCIHSCFQESMIKECGCAYIFYPRPQNVEYCDYRKHSSWGYCYY
                     KLQVDFSSDHLGCFTKCRKPCSVTSYQLSAGYSRWPSVTSQEWVFQMLSRQNNYTVNNK
                     RNGVAKVNIFFKELNYKTNSESPSVTMVTLLSNLGSQWSLWFGSSVLSVVEMAELVFDL
                     LVIMFLMLLRRFRSRYWSPGRGGRGAQEVASTLASSPPSHFCPH-PMSLSLSQPGPAPSP
                     ALTAPPPAYATLGPRPSPGGSAGASSST-CPLGGP"
     polyA_signal    3095..3319
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      3365..3793
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3807..4136
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3987..4122
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             4203..4997
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    5171..5292
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(5743..6328)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6499..7359)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(7360..7464)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat ggaggggaac
     1021 aagctggagg agcaggactc tagccctcca cagtccactc cagggctcat gaaggggaac
     1081 aagcgtgagg agcaggggct gggccccgaa cctgcggcgc cccagcagcc cacggcggag
     1141 gaggaggccc tgatcgagtt ccaccgctcc taccgagagc tcttcgagtt cttctgcaac
     1201 aacaccacca tccacggcgc catccgcctg gtgtgctccc agcacaaccg catgaagacg
     1261 gccttctggg cagtgctgtg gctctgcacc tttggcatga tgtactggca attcggcctg
     1321 cttttcggag agtacttcag ctaccccgtc agcctcaaca tcaacctcaa ctcggacaag
     1381 ctcgtcttcc ccgcagtgac catctgcacc ctcaatccct acaggtaccc ggaaattaaa
     1441 gaggagctgg aggagctgga ccgcatcaca gagcagacgc tctttgacct gtacaaatac
     1501 agctccttca ccactctcgt ggccggctcc cgcagccgtc gcgacctgcg ggggactctg
     1561 ccgcacccct tgcagcgcct gagggtcccg cccccgcctc acggggcccg tcgagcccgt
     1621 agcgtggcct ccagcttgcg ggacaacaac ccccaggtgg actggaagga ctggaagatc
     1681 ggcttccagc tgtgcaacca gaacaaatcg gactgcttct accagacata ctcatcaggg
     1741 gtggatgcgg tgagggagtg gtaccgcttc cactacatca acatcctgtc gaggctgcca
     1801 gagactctgc catccctgga ggaggacacg ctgggcaact tcatcttcgc ctgccgcttc
     1861 aaccaggtct cctgcaacca ggcgaattac tctcacttcc accacccgat gtatggaaac
     1921 tgctatactt tcaatgacaa gaacaactcc aacctctgga tgtcttccat gcctggaatc
     1981 aacaacggtc tgtccctgat gctgcgcgca gagcagaatg acttcattcc cctgctgtcc
     2041 acagtgactg gggcccgggt aatggtgcac gggcaggatg aacctgcctt tatggatgat
     2101 ggtggcttta acttgcggcc tggcgtggag acctccatca gcatgaggaa ggaaaccctg
     2161 gacagacttg ggggcgatta tggcgactgc accaagaatg gcagtgatgt tcctgttgag
     2221 aacctttacc cttcaaagta cacacagcag gtgtgtattc actcctgctt ccaggagagc
     2281 atgatcaagg agtgtggctg tgcctacatc ttctatccgc ggccccagaa cgtggagtac
     2341 tgtgactaca gaaagcacag ttcctggggg tactgctact ataagctcca ggttgacttc
     2401 tcctcagacc acctgggctg tttcaccaag tgccggaagc catgcagcgt gaccagctac
     2461 cagctctctg ctggttactc acgatggccc tcggtgacat cccaggaatg ggtcttccag
     2521 atgctatcgc gacagaacaa ttacaccgtc aacaacaaga gaaatggagt ggccaaagtc
     2581 aacatcttct tcaaggagct gaactacaaa accaattctg agtctccctc tgtcacgatg
     2641 gtcaccctcc tgtccaacct gggcagccag tggagcctgt ggttcggctc ctcggtgttg
     2701 tctgtggtgg agatggctga gctcgtcttt gacctgctgg tcatcatgtt cctcatgctg
     2761 ctccgaaggt tccgaagccg atactggtct ccaggccgag ggggcagggg tgctcaggag
     2821 gtagcctcca ccctggcatc ctcccctcct tcccacttct gcccccaccc catgtctctg
     2881 tccttgtccc agccaggccc tgctccctct ccagccttga cagcccctcc ccctgcctat
     2941 gccaccctgg gcccccgccc atctccaggg ggctctgcag gggccagttc ctccacctgt
     3001 cctctggggg ggccctgaga attctgcaga tatccagcac agtggcggcc gctcgagtct
     3061 agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct
     3121 gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt
     3181 tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg
     3241 ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg
     3301 gatgcggtgg gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat
     3361 ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
     3421 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
     3481 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
     3541 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt
     3601 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
     3661 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat
     3721 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
     3781 tttaacgcga attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
     3841 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
     3901 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
     3961 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
     4021 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct
     4081 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc
     4141 tcccgggagc ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc
     4201 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat
     4261 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt
     4321 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac
     4381 tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg
     4441 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc
     4501 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa
     4561 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc
     4621 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg
     4681 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg
     4741 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa
     4801 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg
     4861 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct
     4921 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc
     4981 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa
     5041 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat
     5101 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt
     5161 cgcccacccc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
     5221 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
     5281 caatgtatct tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg
     5341 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
     5401 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
     5461 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
     5521 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
     5581 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
     5641 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
     5701 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
     5761 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
     5821 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
     5881 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
     5941 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
     6001 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
     6061 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
     6121 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
     6181 aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
     6241 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca
     6301 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
     6361 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
     6421 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
     6481 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
     6541 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
     6601 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
     6661 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
     6721 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
     6781 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
     6841 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
     6901 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
     6961 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
     7021 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
     7081 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
     7141 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
     7201 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
     7261 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
     7321 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
     7381 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
     7441 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4134/pECMV-3×FLAG-ING5人源基因质粒

P4135/pECMV-3×FLAG-ICMT人源基因质粒

P4136/pECMV-3×FLAG-LYPLA1人源基因质粒

P4137/pECMV-3×FLAG-LYPLA2人源基因质粒

P4138/pECMV-3×FLAG-MAGEH1人源基因质粒

P4139/pECMV-3×FLAG-MOB1B人源基因质粒

P4140/pECMV-3×FLAG-ABHD14B人源基因质粒

P4141/pECMV-3×FLAG-CCDC24人源基因质粒

P4142/pECMV-3×FLAG-ZNF22人源基因质粒

P4143/pECMV-3×FLAG-F8人源基因质粒

P4144/pECMV-3×FLAG-DUSP19人源基因质粒