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- 2025年07月07日
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48T
超敏 CRISPR-RNA 等温快速扩增冻干球（试纸条型）
2.原理概述 本试剂盒利用高敏恒温扩增（H-SIA）以及 CRISPR/Cas（基因编辑核酸检测技术）对 样本中 DNA 进行检测。检测结果以试纸条形式呈现。
首先对核酸样本进行高敏恒温扩增（H-SIA），然后向扩增产物中加入 CRISPR 反应体 系并进行恒温检测。若反应体系中的 crRNA(序列中含有与 Cas 蛋白结合的回文序列和与目 的基因序列互补的特异序列)识别到扩增产物中的目的基因序列，则激活 Cas 蛋白的切割活 性，剪切反应体系中的报告 RNA，报告 RNA 被剪切后会发出荧光被仪器检测出荧光信号； 若扩增产物不含目的基因序列，则不激活 Cas 蛋白，报告 RNA 不被剪切。
CRISPR 免疫层析试纸显色原理（消线法）：试纸结合垫中含有鼠源抗 FITC 抗体标记的 乳胶微球，可与报告 RNA 上的 FAM 标记结合，形成完整的“生物素-报告 RNA-FAM-抗 FITC- 乳胶微球”.
复合物：试纸 T 线处包被有链霉亲和素，可与生物素结合，质控线 C 线处包被 有羊抗鼠二抗，可与抗 FITC 抗体结合。若无目的基因序列，则报告 RNA 未被 Cas 蛋白剪 切，反应体系在经过 T 线时，完整的“生物素-报告 RNA-FAM-抗 FITC-乳胶微球”复合物 与链霉亲和素结合，则 T 线显色；若有目的基因序列，则报告 RNA 被 Cas 蛋白剪切，反应 体系在经过 T 线时，切割后形成的“FAM-抗 FITC 抗体-乳胶微球”复合物无法与链霉亲和 素结合，则 T 线不显色。无论报告 RNA 是否被剪切质控线 C 线均能够与复合物中过量的“抗 FITC 抗体-乳胶微球”结合而显色。
3.主要组成成分
4. 产品特点
4.1 外观：试剂盒包装完整，模板稀释液无漏液。
4.2 检测下限：检测自建体系性能达到 100 copy/mL。不同体系检测性能会略有差异。
4.3 重复性：试剂检测同一样本 10 次，结果均一致。
5.有效期 2-8℃避光下有效期为 12 个月。28±2℃避光保存下有效期为 3 个月。
6.检测方法
6.1 准备模板：采用模板稀释液按照试验要求稀释模板。
6.2 H-SIA 等温扩增：取 1.5 ml 离心管放入 1 颗 H-SIA 球，加入引物探针，加入 45.5 µl 模 板（终体积为 50ul），轻弹几次混匀。后 42℃孵育 20 min。 注：F/R 引物推荐用量：10 µM，各加入 1-2µl； 探针推荐用量：500-1000 ng/T。可根据要求进行调整。
6.3 CRISPR 剪切反应：将 1 个 CRISPR 冻干球放入 8 反应管中，加入 45 ul 水溶解，加入 crRNA，加入 5uL 等温扩增产物，上下颠倒混匀后离心。后将 8 联排放于荧光定量 PCR 中， 37℃孵育 20 min 进行 CRISPR 反应。
注：crRNA 推荐用量：100-500ng/T。可根据体系进行调整。 检测通道可根据引物探针不同进行更改。
6.4 试纸条显色：取 80 µl 6.3 反应溶液放入反应管中（酶标板、1.5 ml 离心管等），将试纸 条红色端放入液体中，2 min 后判读结果。
7.检测结果的解释 本试剂盒结果判读采用“消线法”方式，即 C 线 T 线同时显色为阴性结果，仅 C 线显色为阳性结果，C 线不显色结果无效。（注：T 线为靠下端插入液体处。）
阳性结果表示：样本中可能存在检测的病毒核酸，应结合临床症状判断感染状态。
8.注意事项
8.1 本试剂用于体外检测，仅供科研使用，使用前请仔细阅读本说明书。
8.2 本试剂盘应严格按照说明书要求储存，必需在有效期内使用。
8.3 应按说明书严格进行操作，请勿混合使用不同批次组分。
8.4 操作失误或样本量过少都有可能导致检测结果出现偏差。
8.5 如果试剂盒包装损坏、有破损、漏气等，请不要使用该产品。
8.6 试剂袋中的样本处理液、干燥剂不得吞服。
8.7 模板稀释液中含有少量防腐剂，可能对皮肤和眼睛造成刺激。如果该溶液接触到皮肤或 眼睛，立即用大量清水冲洗。 如发生皮肤刺激或皮疹，应及时就诊。
8.8 操作时应注意做好安全防护措施，使用前后清洗或消毒双手。
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