L-α-phosphatidylethanolamine,

转载 层析复性蛋白质

Tris-HCl, pH 8.0 平衡上样，NaCl 浓度梯度洗脱，获得了“天然”状态的活性蛋白质。 在IEC 中，变性剂的浓度梯度并不能每次都获得高的活性回收，例如α乳白蛋白的收率只有10% 左右。原因可能是折叠的中间体很难从层析介质上洗脱出来。为了避免折叠中间体在层析介质上的堆积，我们发展了两种缓冲液系统的复性方法[26] 。溶解的蛋白质吸附在高浓度变性剂缓冲液平衡的层析柱上，梯度降低变性剂的浓度，同时梯度增加盐离子的浓度，这样可以使蛋白质自发折叠的同时，离开原先吸附的位点，向柱下端移动

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上样，最后洗脱出71±15%的活性蛋白质。随后，Batas[12]等人利用SEC 复性了hen egg-white lysozyme 和bovine carbonic anhydrase， 分别获得较好的活性及质量收率。另外，卷曲的DEAE-cellulose 放入层析柱内，类似凝胶过滤层析可以复性蛋白质[13] 。两个重要的因素影响凝胶过滤层析复性蛋白质的收率[14]： 第一个是变性条件下蛋白质的上样，第二个是复性缓冲液中蛋白质结构的变化。Fahey 等人[15,16] 考察了层析介质对复性效率的影响