肺纤维化小鼠模型构建

一、博来霉素（Bleomycin）诱导法（金标准）

1. 气管滴注法（最常用）

• 步骤：

  1. 麻醉小鼠（异氟烷或戊巴bi妥钠）。

  2. 颈部切开暴露气管，用微量注射器注入博来霉素（1.5-3 U/kg，溶于50 μL生理盐水）。

  3. 对照组注入等体积生理盐水。

  4. 缝合伤口，恢复饲养。

• 特点：

  • 造模周期：14-28天（7天开始炎症，14天纤维化高峰）。

  • 优点：重复性好，病理接近人类IPF。

  • 缺点：操作要求高，可能因剂量不当导致急性死亡。

2. 鼻内滴注法（非侵入性）

• 方法：麻醉后，将博来霉素（2-3 U/kg）滴入鼻腔，利用呼吸吸入。

• 特点：操作简单但纤维化程度不均，适合高通量筛选。

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二、石棉/二氧化硅诱导法（职业性肺纤维化模型）

• 方法：

  • 气管内滴注石棉纤维（100-200 μg/只）或二氧化硅（1-2 mg/只）。

  • 造模周期：21-60天。

• 特点：

  • 模拟环境暴露致纤维化，进展缓慢。

  • 需结合炎症刺激（如LPS）加速纤维化。

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三、基因修饰模型

1. TGF-β过表达小鼠

• 方法：通过腺病毒载体气管递送TGF-β1，诱导局部纤维化。

• 特点：快速（7-14天），但依赖病毒转染效率。

2. Telomerase缺陷小鼠（如Terc⁻/⁻）

• 特点：自发肺纤维化，模拟老年性IPF，但周期长（6-12个月）。

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四、验证指标

1. 病理学评估

• HE染色：肺泡结构破坏、炎症细胞浸润。

• Masson三色染色/Sirius Red染色：胶原沉积（蓝色/红色）定量分析。

• 羟脯氨酸检测：肺组织胶原含量（金标准）。

2. 影像学检查

• 微型CT（μCT）：无创监测肺纤维化进展（肺密度增高、结构扭曲）。

3. 分子标志物

• 促纤维化因子：TGF-β1、α-SMA（肌成纤维细胞标志）。

• 炎症因子：IL-6、TNF-α。

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五、注意事项

1. 品系选择：C57BL/6对博来霉素敏感，BALB/c较耐药。

2. 剂量优化：博来霉素需预实验调整（通常2.5 U/kg为平衡点）。

3. 生存率管理：

   • 提供软饲料（避免术后进食困难）。

   • 监测体重下降（>20%需人道终点）。

4. 对照组：必须设生理盐水对照和假手术组（仅切开气管）。

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六、替代方案（减少动物痛苦）

• 荧光报告基因小鼠：如Col1a1-GFP，实时监测纤维化。

• 类器官模型：人源肺类器官+ TGF-β刺激，用于体外筛选。