Cas12b- 切割底物-ssDNA-试纸型DNA-FAM-

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

靠近 5』端的公共部分，保证每个 isoform 都会成功移码突变 通常情况下，为了便于下游 KO mutants 的鉴定，我们往往可以作如上设计：即 Cas9 的切割位点刚好被一个酶切位点跨过，且附近至少 100 bp 内酶切位点唯一。 为了减少 Off-Target 效应，请把设计好的 Target 放在括号中的网址里去做预测，尽量找到一条脱靶效应较小的来继续下游实验。 20 nt 确定之后，请

CRISPR-Cas9 技术敲除酵母菌 ADE1 基因

选育新方法。而 CRISPR-Cas9 技术的出现，更是极大推动了微生物基因组编辑准确性和效率的提高。【背景】泓迅科技利用 CRISPR-Cas9 技术编辑酵母菌中的一个 920bp 的 ADE1 基因。ADE1 是腺嘌呤合成相关基因，如果 ADE1 失活，则细胞将会积累红色色素，呈现红色菌落。【方法】1、质粒构建2、sgRNA 活性检测3、挑选活性较高的 sgRNA 进行基因组定点编辑4、利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。【结论】1、从颜色表型变化得知，酵母菌落变成红色菌落，可知 ADE

CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计

12417 - 12498，一共 82 bp3. 在 Sequence 中查看，复制一整个 segment 的碱基序列如下segment 碱基序列atggccatctacaagcagtcacagcacatgacggaggttgtgaggcgctgcccccaccatgagcgctgctcagatagcgatgStep3 设计 sgRNA首先，先附上鼎鼎大名的张峰实验室提供的网页https://zlab.bio/guide-design-resources1. 打开网页，选择网页工具--博德研究