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诺奖得主 Jennifer 最新研究：CRISPR/Cas12c 无需切割 DNA 就可实现基因沉默，抵御病毒入侵

与 DNA 结合依赖于 pre-crRNA 的加工 上述的实验已经证明 Cas12c 不进行靶 DNA 切割，那么 Cas12c 是否能结合经由 RNA 引导的互补底物？结合筛选实验表明，Cas12c 在低纳米摩尔范围内可结合目标 dsDNA，并对部分碱基配对的 DNA 具有更强的亲和力。因此，这些数据表明，像其他 Cas12 酶和 Cas9 一样，Cas12c 也与目标 ssDNA 具有较高的结合亲和力但不能检测到与 ssRNA 结合。 图片来源：Molecular Cell Cas12c

Cell：诺奖得主新作！在大量病毒中发现微型 CRISPR 系统，可高效编辑人类和植物基因组

和 VI 型系统（识别竞争噬菌体的转录物），III 型系统保留切割 ssDNA 并能够切割靶 DNA 所需的催化残基。 （2）在一些噬菌体 I 型系统中不存在 Cas3 核酸酶，但可能招募 IV 型系统中的效应子。 噬菌体基因组是一个微型 CRISPR-Cas 系统的天然储库，包括属于 Cas9 和 Cas12 超家族的 DNA 靶向 II 型和 V 型酶。与原核基因组中占主导的多亚基 I 型和 III 型 CRISPR 系统不同，噬菌体中显著富集微型 Cas12 家族酶。由于噬菌体进化迅速

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

靠近 5』端的公共部分，保证每个 isoform 都会成功移码突变 通常情况下，为了便于下游 KO mutants 的鉴定，我们往往可以作如上设计：即 Cas9 的切割位点刚好被一个酶切位点跨过，且附近至少 100 bp 内酶切位点唯一。 为了减少 Off-Target 效应，请把设计好的 Target 放在括号中的网址里去做预测，尽量找到一条脱靶效应较小的来继续下游实验。 20 nt 确定之后，请