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- Cytiva
- 瑞典
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- 2025年07月15日
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细胞表达上清镍柱纯化 耐edta的镍柱
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文献和实验今天为大家带来镍柱的保养和清洗建议。 Ni柱的使用与保养 1. 对于一般的预装柱（Crude系列除外），上样前，样品需要使用0.22μm/0.45μm滤膜进行过滤或者离心处理，以避免样品中有细胞碎片等固体物质，堵塞柱子。 2. 如果细胞裂解后非常粘稠，需考虑是否因为DNA、RNA这类核酸物质过多，需要加入核酸酶去除，以降低样品粘稠度，提高上样速度及洗脱效果。 3. 柱子使用过程中，不能超过填料的压力，以免填料被压塌。 4. 每次使用后，可使用5-10倍柱体积的纯水或者结合缓冲
【讨论】请问有谁用过这样 MycHis 载体，他具体是什么功能，谢谢
（Neomycin） 5' 测序引物：T7 prime 3' 测序引物：BGH primer 载体简介：pcDNA3.1/myc-His A 可以在哺乳动物细胞中高表达, 通过G418持续筛选得到目的基因稳定表达的细胞系，载体携带的 myc抗原表位基因表达后能通过HRP（辣根过氧化物酶）标记的抗myc抗体检测融合蛋白，载体C端携带的六组氨酸标签能使表达蛋白通过镍柱纯化” woxingwosu 这个载体应该是同时带有两个标签（tag），即Myc
问：最近在回收凝胶柱时（用的是镍柱），经过多次的洗脱液继续平衡清洗，发现还有一些很难去除的杂蛋白，不知应该用什么方法把这些难除的杂蛋白去除？答：一般用6M盐酸胍+0.2M AC和2%的SDS清洗一般的柱子都是相同过程，大致顺序如下1.6M盐酸胍+0.2M AC2.水3.2%SDS4.水5.乙醇梯度20%-100%-20%，可以任选阶梯型的梯度6.0.1M EDTA7.水7.CHARGE BUFFER9.水10.BINDING BUFFER可以选取其中一部分就行了，不需要每次都做完这个步骤
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