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6 his标签亲和层析 6his-ni亲和层析
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文献和实验和蛋白质，在碱性pH时，使吸附更有效，但选择性降低。金属螯合亲和层析行为在很大程度上，由被吸附的肽和蛋白质分子表面咪唑基和巯基的稠密程度所支配，吲哚基可能也很重要。本实验室纯化的目的蛋白是用IPTG诱导表达的pGFPuv，该蛋白是和6His融和表达的，含有特定的组氨酸标记物，这种可溶性蛋白质能用金属亲和层析法进行分离，且操作简单，快速，纯化效率高。【试剂与器材】〈一〉试剂1. 0.05mol/L EDTA—0.5mol/L ，NaCL溶液100mL2. 2mol/L NaCL 溶液 50
一、仪器设备：1.亲和层析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Poly-Prep column, 0.8×4 cm）2.部分收集器 （另需准备干净试管约25 支）二、药品试剂：1.金属螯合亲和层析胶体（Ni-NTA agarose, QIAGEN 30210）：1 mL。在交联琼脂糖凝胶上接有nitrilotriacetic acid （NTA） 官能基，可以螯合镍离子；使用前先以镍离子饱和的。2.Buffer B-300/0（50 mM Na3PO4, pH 8.0; 0.3 M
若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段，而亲和吸附胶上接有镍离子，此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体；洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。（Pharmacia 操作手册， Affinity Chromatography）。仪器设备：亲和层析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Poly-Prep column, 0.8×4 cm）部分收集器 （另需准备干净试管约25 支）药品试剂：金属螯合亲和层析胶体 （Ni-NTA agarose, QIAGEN 30210） 1 mL◆
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