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文献和实验冷冻融解法 freeze and thawing method
指从细菌、霉菌和酵母等微生物细胞中温和地提取酶、毒素和核酸等物质的方法。先将细胞悬浮液倒在冷冻剂（粉末干冰，丙酮-干冰混合液）中，使其冷冻，然后在 30～ 40℃的温水中融化，这样冷冻和融化反复进行，由于细胞被破坏，其内部物质流入悬浮液中，然后再进行分离提取。
，去上清夜； （3）向细胞沉淀物中加入冷冻保护液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml； （4）按每管1～1.5ml的量分装于冻存管内，拧紧管盖； （5）再冻存管上做好标记，包括细胞代号及冻存日期。 2、分级冷冻 （1）先将冻存管放入普通冰箱冷藏室（4～80C），约40min； （2）接着将冻存管置于普通冰箱冷冻室（-100C～-200C），约30～60min； （3）将冻存管转入低温冰箱（-300C），放置30min左右； （4）然后将冻存管转移
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