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- Thermo Fisher
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- 010-Q等(44)
- 2025年07月13日
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qsp 带滤芯枪头200ul 带滤芯枪头20微升
【北京泽平是Thermo Fisher 一级代理商，具备20年销售服务经验，提供各类试剂、耗材、仪器、软件、服务等一站式解决方案。<)~fX-bB$Ahon#z(JC~`P[Wt#bx>.HNwu],s<3C%D_++:i]CbgWO@`t`vw8{ZoT5=;_v[H[w~a]ULs9eiv1r<~7yo;{e_Gp4(P\}onLUp'O4DZ:D=e3*=)+>TlGFK11^sRo7jw(9CQ[[ERJ_qQ1v0w[=4eWM{5a+kNqaS
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文献和实验CDNA第一条链的合成 （20微升体系） 一、 按以下顺序加样于500微升EP管中 1. RNA 5 UL 2. Oligo Dt 1 UL 3. dNTP 1 UL (浓度10mM) 4. DEPC水 5UL (为试剂盒中配套的水) 共12UL混匀离心——70℃水浴5分钟——冰浴2分钟（片刻） 二、 继续按以下顺序加样 1. 5×BUFFER 4 UL 2. 0.1MDTT 2UL 3. RNase Out* 1UL 混匀——37℃ 2分钟 三、再加M-MLV
板液体每孔在 2ml 左右，不宜太多，或者太少。取两个 1.5mlEP 管，记为 A 管，B 管，每个 EP 管加入 250ul Opti-MEM I，然后 A 管加入 5-10ul lipofectamine 2000，B 管加入 100pM-200pM 的 siRNA（见买来的 siRNA 说明书），然后静置 5min，混合在一起，静置 20min，用 AB 混合液加入到 1.5ml 的无血清培养基 C 内，混匀； 将六孔板里的细胞的液体吸出，用 PBS 清洗两遍； 将 ABC 混合液 2ml
*325=175500 pg=175.5 ng，因此需要的目的片段大概为2.9 ul-8.8 ul。而该反应体系中允许的目的片段最大量为4 ul，我按照最大量加入的。混匀后加入Solution I，16度连接了大概一个小时。然后转化Top 10感受态，冰上20 min， 42度90s，冰上2 min。然后加入900 ul LB 37度培养1小时，取200 ul涂板。第二天过来大概长了20个克隆，我挑了12个，摇了大概3个小时，做了菌液PCR，最后阳性的克隆只有两个。 我把这两个克隆小摇
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