杂交液（30%甲酰胺）

如何做好 Southern 杂交？

大于 109 计数/分/μl。六、杂交Southern 杂交一般采取的是液-固杂交方式，即探针为液相，被杂交 DNA 为固相。杂交发生于一定条件的溶液（杂交液）中并需要一定的温度，可以用杂交瓶或杂交袋并使液体不断的在膜上流动。杂交液可以自制或从公司购买，不同的杂交液配方相差较大，杂交温度也不同。下面给出的为一杂交液配方：PEG 6000 10%；SDS 0.5%；6×SSC；50% 甲酰胺。 该杂交液的杂交温度为 42 ℃。1．预杂交NC 膜浸入 2× SSC 中 5 min，在杂交瓶中加入杂交液

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）

放大，因此灵敏度不如间接标记的方法。实验用具及材料相关溶液的配制1）20×SSC：175.3g NaCl，88.2g柠檬酸钠，加水至1000mL（用10mol/L NaOH调pH 至7.0）。2）去离子甲酰胺（DF）：将10g混合床离子交换树脂加入100mL甲酰胺中。电磁搅拌30min，用Whatman l号滤纸滤。3）体积分数70％甲酰胺/2×SSC：35mL甲酰胺，5mL 20×SSC，10mL水。4）体积分数50％甲酰胺/2×SSC：100mL甲酰胺，20mL 20×SSC，80mL水。5）体积

间接原位PCR（原位杂交PCR）

② 用50%去离子甲酰胺37℃孵育15min； ③加预杂交液20μl/片，在杂交温度下孵育30min～2hr。 二、杂交 1. 试剂与配制 杂交液：50%去离子甲酰胺，5×SSC，10%硫酸葡聚糖，5×Denhardt’s 液，2%SDS，10mg/ml变性的鲑鱼精DNA 2. 操作方法 ① 弃预杂交液，加杂交液（含0.2～5μg/ml探针）10～20μl/片，覆盖经硅化的盖玻片，石蜡膜封片或橡皮泥封片； ② 玻片置于湿盒中，42℃杂交12～18hr（过夜