杂交液（15%甲酰胺）

如何做好 Southern 杂交？

大于 109 计数/分/μl。六、杂交Southern 杂交一般采取的是液-固杂交方式，即探针为液相，被杂交 DNA 为固相。杂交发生于一定条件的溶液（杂交液）中并需要一定的温度，可以用杂交瓶或杂交袋并使液体不断的在膜上流动。杂交液可以自制或从公司购买，不同的杂交液配方相差较大，杂交温度也不同。下面给出的为一杂交液配方：PEG 6000 10%；SDS 0.5%；6×SSC；50% 甲酰胺。 该杂交液的杂交温度为 42 ℃。1．预杂交NC 膜浸入 2× SSC 中 5 min，在杂交瓶中加入杂交液

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）

oC培养箱中烤片2～3h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。 ②取出玻片标本，将其浸在70～75oC的体积分数70％甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3min。 ③立即按顺序将标本经体积分数70％、体积分数90％和体积分数100％冰乙醇系列脱水，每次5min，然后空气干燥。3）杂交 将已变性或预退火的DNA探针10μL 滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18×18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37oC杂交过夜（约15～17h）。由于杂交液较少，而且杂交

间接原位PCR（原位杂交PCR）

与直接原位PCR所不同的是，靶基因在扩增时不进行标记基团的掺入，而是标记一段与扩增片段互补的探针，在扩增结束后，应用此探针进行原位杂交。因此，此处主要介绍原位杂交，其余方法同原位PCR。 一、预杂交 1. 试剂与配制 2×SSC 50%去离子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v） 预杂交液：2×SSC，5%硫酸葡聚糖，50%甲酰胺，0.2%脱脂奶粉 2. 操作方法 ① 在进行完原位PCR扩增后，用2×SSC预浸经乙醇脱水、空气干燥的玻片，并简洗15min；