普通转膜缓冲液

western-blot实验方法

1、试剂耗材的准备：（1）转膜缓冲液（48 mM Tris-HCl，39 mM 甘氨酸，0.037% SDS，20%甲醇）：（2）10 × 丽春红染液：（3）TBS 缓冲液：（4）TBST 缓冲液（含20%Tween20 的TBS 缓冲液）：（5）封闭液（含5%脱脂奶粉的TBST 缓冲液）：（6）一抗、二抗及抗体稀释液：参照说明书，以封闭液或TBST 进行稀释。（7）底物显色液ECL，4℃ 避光保存，现用现配。（8）显影液和定影液用水稀释10 - 20 倍于铝盒中，可多次使用。室温避光存放

免疫印迹实验相关原理介绍

（pH6.8） 1.5 mol/L Tris•HCl（pH8.8） 10% SDS 10% 过硫酸胺（APS） 还原型 5XSDS 上样缓冲液 10X 电泳液缓冲液 10X 转膜缓冲液 1X 转膜缓冲液 10XTBS 缓冲液 1XTBST 缓冲液 封闭缓冲液: 1X TBST含5% w/v 脱脂牛奶或者 1X TBST 含 2%-5% 的牛血清白蛋白(BSA)。 操作步骤 根据待测蛋白分子量大小确定凝胶（分离胶）浓度制胶 上样使用适当的裂解液以及裂解方法裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织

如何做出一手漂亮的 WB 结果？| 实验

根据显色底物显色深浅判断靶基因蛋白的表达量。其检测过程（步骤）如下：显然,免疫印迹杂交试验步骤多，包含多个影响实验结果因素，如 SDS-PAGE 胶浓度、合适甲醇配比转膜缓冲液、一抗来源及其特异性等，而对结果影响较为显著的步骤是蛋白样品的提取与处理，SDS-PAGE 浓度对蛋白分离效果，转膜条件和一抗抗体选取和孵育条件等。本文主要通过比较实验，探讨后三个步骤对结果的影响。（一）SDS-PAGE对蛋白分离同 PCR 实验中琼脂糖浓度对不同长度 DNA 区分度不同，SDS-PAGE 胶中分离胶浓度合理选取