免冰浴快速转膜缓冲液

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

（十二烷基硫酸钠）50 mM Tris-HCl pH 8.0蛋白酶抑制剂Tris-HCl 缓冲液20 mM Tris-HCl pH 7.5蛋白酶抑制剂●电泳、转膜、封闭缓冲液Laemmli 2× 缓冲液/上样缓冲液4% SDS10% 2-巯基乙醇20% 甘油0.004% 溴酚蓝0.125 M Tris-HCl测定 pH 并调节至 pH 6.8。电泳缓冲液（Tris-甘氨酸/SDS）25 mM Tris 碱190 mM 甘氨酸0.1% SDS测定 pH，pH 应为约 8.3。必要时进行调节。转膜缓冲液

【专题讨论】western blotting 培养细胞的蛋白粗提时，用注射器抽吸和超声波破碎有区别吗

我做了半年western blotting了，p53，p15都能做出来，就是做不出来p21和p27.万般无奈，买了CST的9932#cell cycle sample kit，可还是做不出来。上周给CST发了质量投诉报告，老外处理的很积极，5天之内就给我发来了反馈意见。我的操作基本上是按照CST的说明书进行。只有一点不同，我制备蛋白样品的时候用1毫升注射器在冰浴中反复快速抽吸RIPA-细胞悬液，直到液体清亮为止。我没有按说明书上要求的用超声波来破碎细胞，因为我们实验实验室没有此仪器。交投诉报告

免疫沉淀反应（三）——对流免疫电泳实验

对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10-15倍。 血清蛋白在pH8.6条件下带负电荷，所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷，而且它的分子量又较大（为r球蛋白）。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大，也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所谓电渗作用是指在电场中溶液对于一个固定固体的相对移动。 琼脂是一种酸性物质，在碱性