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文献和实验酚红变黄时,更换肠生长培养基。 肠类器官传代 18、在第 14 天左右,通过将肠类器官重新包埋在新鲜的 Matrigel中,来实现传代。 19、在显微镜下观察类器官,吸出孔内的培养基,加入少量 DMEM-F12 培养基。 20、使用 200μl 移液器吸头用力上下吹打 Matrigel 3-5 次,释放 Matrigel 中的类器官。 21、在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养组织 14 天,每 4 天更换一次肠道生长培养基。 图1. 人肠类器官的培养过程【2】 肠类器官的最新应用进展
Cancer Organoid) 培养基,确保基质胶被完全覆盖。放于 37℃,5%CO2 的培养箱中培养,每 2-3 天更换培养基(用于换液的 OCO 培养基内不含 Y27632)。 类器官传代 13、当直径达到约 200-300μm 时,将类器官按照 1:3-1:5 的比例进行传代(具体比例通过类器官的汇合度确定) 14、吸出孔内培养基,加入 400μl 预冷的 DMEM/F12 培养基,并用移液器多次吹打,从基质胶中释放类器官。如果将多个孔合并,则将 400μl 培养基从第一个孔转移到下一个孔
缓慢滴加 650μl 预热的类器官培养基,确保基质胶被完全覆盖。放于 37℃,5%CO2 的培养箱中培养,每 2-3 天更换培养基(用于换液的类器官培养基内不含 Y27632)。 类器官传代 14、吸出类器官培养液,机械分离 Matrigel,然后加入 500μl 胰蛋白酶,放置于 37℃ 培养箱中孵育 1-2min 后,用移液器多次吹打,从基质胶中释放类器官。 15、用含有 10%FBS 的 DMEM/F12 培养基终止消化,在 4℃ 条件下 300g 离心 5min。 16、用冷 PBS
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