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100 mL
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文献和实验酚红 0.02g 溶于1000ml水中 染色体的G带核型实验中胰蛋白酶用生理盐水配制。 二、EDTA溶液 又称versene,一般用其钠盐,因可溶性较好。有些组织需要Ca2+ 、Mg2+ 来保持其完整性,用EDTA来排除这些离子,可使细胞之间裂解,以分散细胞。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%,以无钙、镁的平衡
。4、从温箱中取出培养瓶,向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml,然后缓缓翻转培养瓶,让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块,置于37℃温箱内培养。5、一周后取出培养瓶,弃去瓶内培养液,Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后,同样方法每周换液两次。(二)传代培养待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。1、吸出培养瓶内的培养液,Hank,s液漂洗两次,向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。2、大约1分钟左右,镜下观察细胞胞质回缩,细胞间隙增大时
化解离形成细胞悬液,传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来,常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和EDTA溶液,有时也用胶原酶(collagenase)溶液。 1.胰酶溶液:胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示,常见有1:125和1:250,即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度,配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液(如前面的D-Hank"s),因为这些物质会对胰酶产生抑制作用。胰酶作用及溶解的最佳pH
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