0.25%胰蛋白酶消化液（溶于D-Hank's，含EDTA，

成纤维细胞的培养和形态

。4、从温箱中取出培养瓶，向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml，然后缓缓翻转培养瓶，让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块，置于37℃温箱内培养。5、一周后取出培养瓶，弃去瓶内培养液，Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后，同样方法每周换液两次。（二）传代培养待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。1、吸出培养瓶内的培养液，Hank,s液漂洗两次，向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。2、大约1分钟左右，镜下观察细胞胞质回缩，细胞间隙增大时

小鼠成骨细胞的培养和传代

原代培养1.取新生3d以内BALB/c小鼠，断颈处死后立即投入75%酒精中消毒5min（虽有头部皮肤保护，但时间不要过长，所以事先要把准备工作做好之后再去杀老鼠）。2.D-Hank’s液漂洗后分离颅盖骨，刮除骨膜和结缔组织，DMEM清洗颅骨骨片并剪碎。（自我感觉碎一点好一些）3.加入0.25%胰蛋白酶（含0.02EDTA），37°恒温消化20min，吸出消化液，之后1mg/1mlI型胶原酶37°恒温消化20min后离心（1000r/min，5min），弃上清液。（消化时间自己摸索，之前我消化

细胞培养常用的溶液（之一）——消化液

盐溶液配制。 实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率，细胞分散情况改善。 EDTA不能被血清抑制，所以消化后必须彻底清洗。 EDTA对成纤维细胞作用差。 三、胶原酶溶液 1 ．用Hank's液配制成2000U/ml 2 ．36.5度搅拌溶解1h，4度过