0.25%胰蛋白酶消化液（溶于D-Hank's，含EDTA，

培养细胞的保存和复苏

P.S 100μg/ml。（注：P.S不能冻融多次，应少量分装，一次用完）。④NaHCO3液，用于调整pH值，常用浓度为5~6%，配制用三蒸水溶解后过滤除菌或高压灭菌，分装4℃保存。⑤胰蛋白酶在pH 8.0，温度37℃时作用力最强（详见配方）。⑥EDTA液（详见配方）。附：胰酶消化液配方（500ml）NaCl 4gKCl（19%）1 mlNa2HPO4 0.126g（12H2O）Tris1.5g（三羟甲基氨基甲烷）以上药物充分溶解后加水至500 ml，然后再加胰蛋白酶5g，最后用1N HCL调

成纤维细胞的培养和形态

。4、从温箱中取出培养瓶，向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml，然后缓缓翻转培养瓶，让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块，置于37℃温箱内培养。5、一周后取出培养瓶，弃去瓶内培养液，Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后，同样方法每周换液两次。（二）传代培养待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。1、吸出培养瓶内的培养液，Hank,s液漂洗两次，向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。2、大约1分钟左右，镜下观察细胞胞质回缩，细胞间隙增大时

细胞培养常用的溶液（之一）——消化液

酚红 0.02g 溶于1000ml水中 染色体的G带核型实验中胰蛋白酶用生理盐水配制。 二、EDTA溶液 又称versene，一般用其钠盐，因可溶性较好。有些组织需要Ca2+ 、Mg2+ 来保持其完整性，用EDTA来排除这些离子，可使细胞之间裂解，以分散细胞。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡