0.25%胰蛋白酶消化液（溶于D-Hank's，含EDTA，

成纤维细胞的培养和形态

。4、从温箱中取出培养瓶，向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml，然后缓缓翻转培养瓶，让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块，置于37℃温箱内培养。5、一周后取出培养瓶，弃去瓶内培养液，Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后，同样方法每周换液两次。（二）传代培养待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。1、吸出培养瓶内的培养液，Hank,s液漂洗两次，向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。2、大约1分钟左右，镜下观察细胞胞质回缩，细胞间隙增大时

细胞培养常用的溶液（之一）——消化液

酚红 0.02g 溶于1000ml水中 染色体的G带核型实验中胰蛋白酶用生理盐水配制。 二、EDTA溶液 又称versene，一般用其钠盐，因可溶性较好。有些组织需要Ca2+ 、Mg2+ 来保持其完整性，用EDTA来排除这些离子，可使细胞之间裂解，以分散细胞。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡

小鼠成骨细胞的培养和传代

原代培养1.取新生3d以内BALB/c小鼠，断颈处死后立即投入75%酒精中消毒5min（虽有头部皮肤保护，但时间不要过长，所以事先要把准备工作做好之后再去杀老鼠）。2.D-Hank’s液漂洗后分离颅盖骨，刮除骨膜和结缔组织，DMEM清洗颅骨骨片并剪碎。（自我感觉碎一点好一些）3.加入0.25%胰蛋白酶（含0.02EDTA），37°恒温消化20min，吸出消化液，之后1mg/1mlI型胶原酶37°恒温消化20min后离心（1000r/min，5min），弃上清液。（消化时间自己摸索，之前我消化