LPS诱导急性肺损伤小鼠模型构建

一、实验材料准备

1. 实验动物
   • 通常选用6-8周龄C57BL/6或BALB/c小鼠（体重18-22g），雄性居多（避免雌激素影响）。
   • 提前适应性饲养1周，环境温度22-25℃，12小时光暗循环。
2. 试剂
   • 脂多糖（LPS，来源：大肠杆菌O55:B5或O111:B4，常用剂量5-20 mg/kg）。
   • 麻醉剂（如异氟烷或戊巴bi妥钠）。
   • 生理盐水（用于溶解LPS和对照）。
   • duo聚甲醛（用于肺组织固定，可选）。
3. 仪器
   • 微量注射器（50-100 μL）、气管插管套管（如24G静脉导管）、小动物呼吸机（如需精确控制呼吸）。

二、建模步骤

1. LPS给药

• 气管滴注法（最常用）
  1. 麻醉小鼠（异氟烷吸入或腹腔注射戊巴bi妥钠）。
  2. 将小鼠仰卧固定，颈部消毒，纵切口暴露气管。
  3. 用微量注射器将LPS溶液（50 μL，溶于生理盐水）缓慢注入气管（针头倾斜45°避免刺穿气管）。
  4. 迅速直立小鼠并旋转，使LPS均匀分布至双肺。

• • 剂量参考：5-10 mg/kg（轻度损伤），10-20 mg/kg（重度损伤）。

• 鼻腔滴注法（无创，但变异较大）

• 1. 轻度麻醉小鼠，头仰45°。
  2. 将LPS溶液（30-50 μL）逐滴滴入鼻腔，自然吸入。

• 腹腔注射法（全身炎症模型，肺损伤较轻）

• • 直接腹腔注射LPS（10-20 mg/kg），但肺特异性较低。

2. 观察与样本收集

• 时间点：LPS诱导后6-24小时达炎症高峰，48小时开始修复。
• 终点指标：
  • 肺湿/干重比：取肺组织称重（湿重），65℃烘48小时后称干重。
  • 支气管肺泡灌洗液（BALF）：收集灌洗液检测炎性细胞（中性粒细胞）、蛋白浓度（如BCA法）、炎症因子（IL-6、TNF-α）。
  • 病理学：肺组织4%duo聚甲醛固定，HE染色观察肺泡壁增厚、炎性浸润、出血等。
  • 血气分析：PaO₂/FiO₂比值评估氧合功能。

三、关键注意事项

1. 剂量优化：预实验确定LPS剂量，避免过高致死（如>20 mg/kg可能致24小时内死亡）。
2. 操作技巧：气管滴注时控制注射速度（>10秒），避免窒息；鼻腔滴注需确保完全吸入。
3. 对照组设置：
   • 阴性对照：生理盐水处理。
   • 假手术组：仅暴露气管不注射。
4. 伦理与福利：
   • 麻醉深度监测，术后提供软食和保温。
   • 根据实验终点计划人道终点（如体重下降>20%需提前an乐死）。

四、模型验证

• 成功标志：
  • 病理显示肺泡结构破坏、炎性细胞浸润。
  • BALF中中性粒细胞比例显著升高（>50%）。
  • PaO₂/FiO₂ <300 mmHg（正常>400 mmHg）。
• 常见问题：
  • 无损伤：可能因LPS失效或注射未入肺（可尝试台盼蓝染色验证分布）。
  • 死亡率高：降低LPS剂量或改用鼻腔滴注。