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文献和实验性。 近日,《Nature Cell Biology》期刊在线发表了题为《通过内源性启动子驱动的 sgRNA 监测低丰度转录本和 lncRNAs 的表达》的研究论文,该研究通过内源基因的启动子驱动 sgRNA(single-guide RNAs)表达,结合 SPH-OminiCMV(CRISPR-activator Suntag-P65-HSF1 and OminiCMV-mCherry)荧光报告系统,成功实现低丰度基因和 lncRNAs(Long non-coding RNAs) 基因
小,因此能够监测在细胞代谢过程中的基因变化。通过对比LPS处理的巨噬细胞周期实验发现,Live-seq技术与对照组的细胞代谢水平相比没有明显变化,因此这种方法测量的数据十分接近细胞代谢中基因表达的真实水平。通过测序对比LPS处理与空白的测序结果发现Nfkbia与Tnf的表达为相关。这一结果也验证这种测序方法在检测细胞下游表型时的优势。 图4. Live-Seq技术的单细胞纵向分析。a. 实验示意图;b. 不同处理细胞的mCherry强度变化;c. 3~7.5h之间mCherry强度变化;d
一、实验材料NCI-H1299,购自上海晶莱生物技术有限公司。表 2.1.1 主要试剂试剂与耗材厂家(货号)细胞培养瓶FALCON 中国(353014)Penicillin/streptomycin solution(KGY002)0.25% Tripsin-EDTA(BK-E3076)PBS(BK330-2)胎牛血清GIBCO 美国(10270-106)1640 培养基Hyclone 美国(SH3080901)Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 二、实验仪器表 2.2.1 主要
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