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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
0
- 英文名:
Buccutite™ Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*
- 保质期:
6个月
- 供应商:
西安百萤生物科技有限公司
- 保存条件:
在2-8度冷藏保存, 避免光照
- 规格:
2 Labelings
适用范围
主要用于标记抗体
产品介绍
别藻蓝蛋白(APC)是一种红色荧光蛋白,其激发波长为651 nm,发射波长为662 nm。AAT Bioquest公司提供的Buccutite™快速标记试剂盒可高效实现APC-Cy5.5与抗体及链霉亲和素等蛋白试剂的偶联。该Buccutite™ APC-Cy5.5偶联试剂盒包含预活化APC-Cy5.5和反应缓冲液,为抗体-APC-Cy5.5偶联提供稳定便捷的解决方案,偶联产物可应用于流式细胞术、蛋白质印迹(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组化(IHC)等检测。每盒试剂可完成2次标记反应,每次最多标记25 μg抗体(具体抗体比例需通过实验优化)。
该试剂盒采用预活化APC,相比传统的SMCC化学偶联法具有显著特点:1)即用型设计,偶联产率更高;2)通过蛋白质中丰富的氨基基团直接偶联(传统SMCC法需还原抗体再生巯基基团)。
百萤生物是AAT Bioquest中国区域官方授权代理
注:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验可以将干扰扣除,但补偿值越大,补偿后的信号分辨率会降低越厉害。最好选择很少或者没有重叠的荧光基团,以最大限度减少这种渗漏。不同激光激发的染料是首选,如PE和APC,但在某些情况下,这可能与尽量选择亮的荧光素的规则是冲突的。如在进行四色分析时,经常会将PE-Cy5标记的抗体与APC标记的抗体搭配使用。因为Cy5的激发波长与APC的激发波长相近,所以PE-Cy5与APC均可被红色激光(640nm)所激发,而两者的发送光谱也比较接近,导致PE-Cy5与APC的颜色补偿很难调整。相反,由于PE-Cy5.5中的
抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低,实验程序少尽量减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择: 如果实验中检测单一指标:不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常来说,PE最强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原,使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
光补偿? 流式细胞术中常用的荧光抗体,是将纯化的一抗通过化学方法耦联FITC、PE等荧光素制成的直接标记试剂。其工作原理基于荧光效应:荧光素分子在特定波长激光激发下跃迁至激发态,随后退激发释放出波长更长的荧光。由于荧光素内部的共轭双键结构差异,不同染料的发射光谱较宽(通常跨度100-200 nm),导致彼此间存在显著重叠。这种光谱重叠使得单一荧光染料的信号常被相邻检测通道同时捕获,产生荧光信号溢出(Spillover)现象,即“串色”,必须通过补偿算法予以校正以确保数据准确。 流式补偿调好之后能不能一直
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