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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Buccutite™ Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*
- 保质期:
6个月
- 供应商:
西安百萤生物科技有限公司
- 保存条件:
在2-8度冷藏保存, 避免光照
- 规格:
2 Labelings
实验方案
1.向25 µl抗体溶液中加入1.25 µl反应缓冲液(组分C)
2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉(组分B)
3.室温孵育30分钟
4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化APC-Cy5.5(组分A)
5.室温继续孵育60分钟
重要保存说明:
1.试剂盒需4℃保存(有效期6个月),组分B可-20℃冻存
2.禁止冷冻组分A(活化APC-Cy5.5)与组分C(反应缓冲液)
3.使用前需室温平衡所有组分,短暂离心后立即配制工作液
注:本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。
抗体工作液配制
抗体浓度1 mg/mL时
取25 μL抗体溶液(含25 μg抗体)加入1.25 μL反应缓冲液(组分C,占总反应体积5%)
注意事项
1.浓度调整:若抗体浓度≠1 mg/mL,需调整体积确保投入~25 μg抗体
2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH 7.2-7.4;如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS,pH 7.2-7.4透析,或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器(Cat. # 60502 from AAT Bioquest)去除游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)
3.避免含BSA/明胶的抗体
4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率
5.推荐工作浓度1-10 mg/mL
Buccutite™ MTA工作液配制
向Buccutite™ MTA(组分B)的小瓶中加入10 µLDMSO(DMSO,本品未提供)。
Buccutite™ FOL活化APC-Cy5.5工作液配制
向Buccutite™ FOL活化APC-Cy5.5(组分A)的小瓶中加入50 µL ddH2O
抗体-Buccutite™ MTA反应步骤
1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA(组分B)管中,通过反复吹吸或短暂涡旋(约5-10秒)充分混匀
2.室温(25±2℃)静置反应30-60分钟
注:可根据需求延长旋转或振荡孵育时间
抗体-APC-Cy5.5偶联制备
1.加入Buccutite™ FOL活化APC-Cy5.5工作液与抗体,通过过反复吸吹几次或漩涡振荡几秒钟来充分混合。
2.培养1-2小时
3.抗体-APC-Cy5.5偶联物现已准备好使用
注:如需立即使用,抗体-APC-Cy5.5偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。
抗体-APC-Cy5.5偶联物保存
浓度要求:≥0.5 mg/mL(需添加0.1% BSA等载体蛋白)
短期保存:4℃避光
长期保存:冻干后≤-20℃储存
注意事项
避免反复冻融
使用前需离心去除潜在沉淀
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文献和实验可以将干扰扣除,但补偿值越大,补偿后的信号分辨率会降低越厉害。最好选择很少或者没有重叠的荧光基团,以最大限度减少这种渗漏。不同激光激发的染料是首选,如PE和APC,但在某些情况下,这可能与尽量选择亮的荧光素的规则是冲突的。如在进行四色分析时,经常会将PE-Cy5标记的抗体与APC标记的抗体搭配使用。因为Cy5的激发波长与APC的激发波长相近,所以PE-Cy5与APC均可被红色激光(640nm)所激发,而两者的发送光谱也比较接近,导致PE-Cy5与APC的颜色补偿很难调整。相反,由于PE-Cy5.5中的
抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低,实验程序少尽量减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择: 如果实验中检测单一指标:不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常来说,PE最强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原,使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
SE 活性部分远低于50%(AlexaFluor488微量标记试剂盒产品信息,Invitrogen)。相反,所有Biotium 的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型,这比大部分AlexaFluor 染料的SE更耐水解。总体来说,CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率,提供给用户更好的使用价值。选择方案:蓝色(350-450nm处激发) CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发CF350是类似于Alexa Fluor 350和传统荧光染料AMCA的蓝色
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