HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞荧光素酶标记

背景介绍

复旦大学中山医院肝癌研究所在研究MHCC97时发现其是异质性很强的细胞群。部分细胞有很强的致瘤性和转移力，而部分则较弱。因此分离建立了高低转移性不同的肝癌细胞株MHCC97-H和MHCC97-L。据报道MHCC97-H存在较高的干细胞样的侧群细胞(sp)。肝癌SPChemicalbook细胞具有极高的致瘤性，并可能和肝癌转移潜能相关。HCCLM3细胞是一株由人肝癌细胞株MHCC97-H接种裸鼠，进行3次肺转移筛选、取肺转移瘤建成皮下接种后高度自发性肺转移的肝癌细胞系。HCCLM3细胞被广泛用于人肝癌发病机理的基础和临床研究，也可用于抗肿瘤药物筛选。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞荧光素酶标记产品基本信息

细胞名称：HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞荧光素酶标记

种属来源：人

组织来源：肝癌

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：DMEM+10%FBS+1%P/S

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞培养操作

HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞复苏步骤

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

HCC-LM3+LUC人高转移肝癌细胞冻存步骤

待HCC-LM3+LUC细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项

1. 收到HCC-LM3+LUC细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该HCC-LM3+LUC人细胞仅供科研使用。

7. 说备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

8. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。