Sheep甲基化酶(Methylase)ELISAKit

甲基化酶（Methylase）的种类及其对限制性酶切的影响

相关专题 重组DNA技术工具酶 一、甲基化酶的种类 原核生物甲基化酶是作为限制与修饰系统中的一员，用于保护宿主 DNA 不被相应的限制酶所切割。在 E.coli 中，大多数都有三个位点特异性的 DNA 甲基化酶。 1.Dam 甲基化酶 Dam 甲基化酶可在 GATC 序列中的腺嘌呤 N6 位置上引入甲基。一些限制酶(PvuⅡ, BamHⅠ、BclⅠ、BglⅡ、XhoⅡ、MboⅠ、 Sau3AⅠ

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的。因此，这种限制性内切酶切割后产生的一定长度DNA片段，具有各种单链末端。这对于克隆基因或克隆DNA片段没有多大用处。 二、甲基化酶 细胞的限制-修饰系统中的修饰作用是由甲基化酶（methylase）来完成的。甲基化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序。甲基化酶使识别顺序中的某个碱基发生甲基化，保护DNA不被限制性内切酶切开。 真核生物中目前只发现5-甲基胞嘧啶（M5C）。M5C占整个胞嘧啶中的2～7%（果蝇和某些昆虫例外）。M5C大多以M5CpG的形式存在，不同物种或同一

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methylase的影响。另外一种方法是，使用dam、dcm甲基化酶欠损的宿主菌 (例如GM33、JM110)进行DNA的转化和制备。还可以使用PCR方法对该DNA进行扩增，然后再进行酶切。 ↑TOP Q-7: 限制酶活性定义的1 U是在37℃条件下，经1小时，将1 µg λDNA完全切断的酶量，对所有的底物DNA都可以完全切开吗? A-7: 由于底物DNA的不同，其含有的酶切位点的摩尔浓度不同，空间结构也不相同，这些，都会对酶切