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48T
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文献和实验有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗? 近年来在原核表达体系中,谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍,它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解,从而除去GST蛋白。正是由于以上的优点,商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
buffer(加75μl CaCl2和0.12g还原型谷胱甘肽) ④3M NaCl 3.纯化步骤及注意事项: ①PBS平衡柱子:至少5个柱体积 ②上样:经对比发现,上样流速需极慢才能结合,一般上样过夜(纯化原理是谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白对谷胱甘肽的亲和力) ③PBS洗杂蛋白:洗到紫外监测基线平,至少1小时,时间充分的话最好用较慢流速洗2到3小时,这样洗脱下来的目的蛋白中杂蛋白较少。 ④
)时。这有助于研究低丰度蛋白质和优化难以表达的蛋白质项目。它也是一个很好的纯化标签。FLAG 序列还含有肠激酶切割位点,如果标签位于 N 端,切除后不留多余的残基。谷胱甘肽 S - 转移酶(GST)GST 是最早被使用的表位标签之一;它可以置于 N 或 C 端并可以蛋白质的可溶表达。用谷胱甘肽结合树脂进行纯化。绿色荧光蛋白(GFP)在表位标签中独一无二,GFP 是一种自发荧光的 27 kDa 标签,可通过荧光显微镜直接在活细胞中检测到。血凝素 A(HA)HA 来自流感血凝素蛋白的结合结构域,含有高
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