- ￥960
- EK-Bio(酶研生物）
- BC02468
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
48T
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
Human自噬相关蛋白LC3-II(LC3-II)ELISA KIT
3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
Human自噬相关蛋白LC3-II(LC3-II)ELISA KIT5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
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文献和实验点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 3. 利用 Western Blot 检测 LC3-II/I 比值的变化以评价自噬形成 自噬形成时，胞浆型 LC3（即 LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即 LC3-II），因此，LC3-II/I 比值的大小可估计自噬水平的高低。 LC3 抗体对 LC3-II 有更高的亲和力，会造成假阳性。方法 2 和 3 需结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。 4. MDC 染色 MDC 染色
多功能蛋白，除了接受自噬信号，它还可以接受很多其它的信号对自噬进行调节。 3） P53 信号通路：在细胞核中，P53 能与多种蛋白作用，如 sestrin1/2 蛋白、DAPK1、BCL-2 家族、DRAM1 等作用，发挥上调细胞的自噬水平功能。而在细胞质中，P53 能够发挥抑制细胞自噬水平的功能。 自噬检测： LC3 是自噬标志物，自噬形成时，胞浆型 LC3（即 LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即 LC3-II），LC3-II/I 比值的大小可估计自噬
：LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力，会造成假阳性。方法2和3需结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。） 4）检测长寿蛋白的批量降解：非特异 5）MDC（Monodansylcadaverine，单丹磺酰尸胺）染色：包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特异性的。 6）CellTrackerTM Green染色：主要用于双染色，但其能染所有的液泡，故也属于非特异性的。 在研究自噬相关蛋白时，需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体
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