AnnexinV-Alexa Fluor 647/PI细胞凋

AnnexinV-Alexa Fluor 647/PI细胞凋亡测定试剂盒
英文名： AnnexinV-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit
描述：
磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜 PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行红色荧光Alexa Fluor 647标记，以标记了的Annexin V作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此采用Annexin V与PI双染的方法，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，右下象限为早期凋亡细胞，右上象限是凋亡晚期细胞和坏死细胞。
储存条件：
2-8℃  避光
所需实验器材：微量移液器；PBS； 不含EDTA的胰酶消化液； 低速离心机； 流式细胞仪
注意事项：
1.此试剂盒仅供研究使用。
2.微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用。
3.Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。
4.Annexin V-Alexa Fluor 647中含有剧毒成分叠氮hua钠（NaN3）, 操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。
5.本试剂盒用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1x106。
6.染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
7.Annixin V检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测。对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测，可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞。我不推荐用该方法检测。因为其重复性较差，且需要操作时非常小心。
8.消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解Annexin V-Alexa Fluor 647，最终导致染色失败。
9.细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。