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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输,按要求保存,12个月有效。
- 库存:
现货
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
3×50ml
用途:含有RIPA裂解液(强)、RIPA裂解液(中)和RIPA裂解液(弱)各50ml,以及PMSF 2ml,便于实验时探索不同的实验条件。
注意事项:主要由NP-40、脱氧胆酸钠、磷酸钠、SDS、EDTA、蛋白酶抑制剂等。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储运及效期(运输/储存/有效期):低温运输,按要求保存,12个月有效。
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文献和实验min。10000g,4℃离心10min,将上清转移到新管中。6 ) 按每5×106 个细胞加0.5ml细胞裂解液,取相应的裂解液到新管中准备免疫共沉淀(IP)反应,每个反应中加入8-15μg抗体,冰上摇3h。7 ) 加50ml 50%颗粒悬浮液,4℃摇1h。8 ) 10000g离心15s,弃上清。9 ) 用1ml RIPA缓冲液洗涤颗粒两次,以除去无特异结合的蛋白,然后用1ml PBS洗涤3次。10) 60μl样品缓冲液悬浮颗粒,95℃煮沸5min;SDS-PAGE电泳前样品10000g
保存。 13、如何鉴定提取的外泌体? 通常会用到:透射电镜检测(形态)、NTA 粒径检测(大小)、Western Blot 检测等方法对提取的外泌体进行鉴定。在进行 Western Blot 检测时,常用的外泌体标志蛋白有CD63、CD9、CD81、TSG101 等。 14、提取的外泌体进行 Western Blot 前是否需要加入 RIPA 试剂裂解? 需要。一般按照 1:1 的比例加入强 RIPA 试剂,或推荐使用外泌体蛋白专用裂解液。 15、进行外泌体 Western Blot 鉴定时有无内参
有黑点。 方法4 免疫印迹 1样品制备和蛋白定量 1.1 容液配制 10ml100mmol/L PMSF:0.1742g溶于10ml的异丙醇中,至与4?C保存。 50ml 5mol/L NaCl:14.61g溶于40ml三蒸水中,定容至50ml。 100ml 20% SDS:20g溶于80ml水中,加热溶解,定容至100ml。 100ml 1mol/LTris-HCl: 12.114g溶于80ml三蒸水中,定容至100ml。 配RIPA裂解液
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